[发明专利]一种荧光微球与抗体的偶联方法

权利要求书

1.一种荧光微球与抗体的偶联方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)将荧光微球进行活化处理、重悬，得到微球悬浮液；

(b)将抗体溶液添加至微球悬浮液中进行反应、超声处理、继续反应；

(c)待反应结束后，向反应液中添加封闭液进行封闭、离心，收集沉淀物；

(d)将沉淀物置于甘氨酸溶液中、超声分散，即得荧光微球与抗体偶联的复合物。

2.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(a)中，活化处理具体为：

将荧光微球清洗后进行超声分散、稀释，随后依次向稀释后的荧光微球溶液中添加含有NHS的乙醇溶液和含有EDC的乙醇溶液、混匀、常温反应、超声处理、离心，收集活化后的荧光微球。

3.根据权利要求2所述的偶联方法，其特征在于，所述稀释采用的稀释剂为含聚乙烯吡咯烷酮的MES缓冲液，聚乙烯吡咯烷酮浓度为0.05-2％，稀释后的荧光微球固含量为0.8-1.2‰。

4.根据权利要求2所述的偶联方法，其特征在于，所述含有NHS的乙醇溶液和含有EDC的乙醇溶液的添加量分别与荧光微球溶液的体积比均为1∶(22-28)；所述含有NHS的乙醇溶液中NHS的浓度为8-12mg/ml；所述含有EDC的乙醇溶液中EDC的浓度为8-12mg/ml。

5.根据权利要求2所述的偶联方法，其特征在于，所述常温反应时间为25-35min。

6.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(a)中，微球悬浮液中荧光微球的固含量为0.08-0.12％。

7.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(b)中，抗体溶液与微球悬浮液的体积比1∶(180-220)；抗体溶液中抗体浓度为2.8-3.0mg/ml。

8.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(b)中，反应时间为50-70min；超声处理时间为55-65s，超声波频率40KHZ；继续反应时间为55-65min。

9.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(c)中，封闭液为20％的BSA，且添加后的反应液中BSA浓度为0.4-0.6％；封闭时间为55-65min。

10.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(d)中，甘氨酸溶液中甘氨酸浓度为4.5-5.5％。