[发明专利]一种干眼病用眼泪代谢组学分析代谢途径变化的方法及其应用

说明书

本发明涉及的一种干眼病用眼泪代谢组学分析代谢途径变化的方法，收集正常人和干眼病患者眼泪样本；对样本进行UHPLC‑Q‑TOF‑MS检测，得到原始代谢指纹图谱，对测到的代谢物进行鉴定，得到正常人和干眼病患者眼泪样本的代谢物数据，将正常人和干眼病患者眼泪样本的代谢物数据，通过中位数归一化法进行数据标准化后，借助有监督模式识别的偏最小二乘判别分析法结合T检验法筛选出差异的代谢物。本发明的有益效果在于：本发明干眼病用眼泪代谢组学分析代谢途径变化的方法是通过收集正常人和干眼病患者眼泪样本，反映正常人和干眼病患者眼泪样本的眼泪中的代谢物变化情况，能够对判断干眼病是否治疗提供有效的参考。

技术领域

本发明涉及了代谢组学应用领域，具体的是一种干眼病用眼泪代谢组学分析代谢途径变化的方法及其应用。

背景技术

干眼是多种因素作用下泪液质、量或动力学异常而引起的泪膜稳定性下降，并伴有眼部不适和(或)眼表组织病变特征的多种疾病的总称。流行病学研究显示，干眼在我国的发病率为21％-30％，随着空气污染的加重以及手机、电脑等电子产品的广泛使用，干眼的发病率迅速增加，已经成为近年来重要的公共健康问题。目前，干眼患者临床诊断一般通过泪液分泌试验(SchirmerItest,SIT)、泪膜破裂时间(breakup time，BUT)和角膜荧光染色等指标方面实现。

发明内容

为了克服现有技术中的至少部分缺陷，本发明实施例提供了一种干眼病用眼泪代谢组学分析代谢途径变化的方法及其应用，它通过正常人和干眼病患者眼泪样本，能够反映正常人和干眼病患者眼泪中的代谢物变化情况，然后通过分析得到与干眼病发病机制密切相关的代谢途径，而且取样简单，取样过程短，能够显著缩短样本的处理时间，为干眼病的治疗效果判断提供参考。

本申请实施例公开了：一种干眼病用眼泪代谢组学分析代谢途径变化的方法，包括以下步骤：

S1、收集正常人和干眼病患者眼泪样本，作为分析样本；

S2、将每个分析样本采用UHPLC-Q-TOF-MS代谢组学技术进行分析，得到正常人和干眼病患者眼泪样本的原始代谢指纹图谱；

S3、将正常人和干眼病患者眼泪样本的原始代谢指纹图谱与Personal CompoundDatabase andLibrary(PCD/PCDL)数据库、Massbank数据库和人眼泪代谢组学参考文献中的二级质谱数据相比较，对测到的代谢物进行鉴定，得到正常人和干眼病患者眼泪样本的代谢物数据；

S4、将正常人和干眼病患者眼泪样本的代谢物数据，通过中位数归一化法进行数据标准化后，借助有监督模式识别的偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)结合T检验法筛选出差异的代谢物；

S5、将差异代物通过MetaboAnalyst在线软件进行“Pathway analysis”分析，选择“Hypergeometric Test”算法和“Home sapients”数据库，根据p＜0.05确定显著变化的代谢途径。

色谱柱为Agilent Eclipse-plus C18柱，规格为150×3.0mm,1.8μm，进样量为3.00μl，柱温为40摄氏度；流动相A为0.1％甲酸(formic acid)水溶液，B为100％乙腈(acetonitrile)；流动相的洗脱梯度如下：0min,98.0％A；1.0min,98％A；5.0min,60％A；12.0min,30％A；15.0min,5％A；20.0min,5％A。流动相的流速为0.40ml/min；