[发明专利]一种干眼病用眼泪代谢组学分析代谢途径变化的方法及其应用

权利要求书

1.干眼病用眼泪代谢组学分析代谢途径变化的方法在判断干眼病治疗效果中的应用，其特征在于，所述干眼病用眼泪代谢组学分析代谢途径变化的方法，包括以下步骤：

S1、收集正常人和干眼病患者眼泪样本，作为分析样本；

S2、将每个分析样本采用UHPLC-Q-TOF-MS代谢组学技术进行分析，得到正常人和干眼病患者眼泪样本的原始代谢指纹图谱；

S3、将正常人和干眼病患者眼泪样本眼泪样本的原始代谢指纹图谱与 PersonalCompound Database and Library (PCD/PCDL)数据库、Massbank 数据库和人眼泪代谢组学参考文献中的二级质谱数据相比较，对测到的代谢物进行鉴定，得到正常人和干眼病患者眼泪样本代谢物数据；

S4、将正常人和干眼病患者眼泪样本的代谢物数据，通过中位数归一化法进行数据标准化后，借助有监督模式识别的偏最小二乘判别分析法（PLS-DA）结合T检验法筛选出差异的代谢物；

S5、将差异代物通过MetaboAnalyst在线软件进行“Pathway analysis”分析，选择“Hypergeometric Test”算法和“Home sapients ”数据库，根据p＜0.05确定显著变化的代谢途径；

显著变化的代谢途径的为Aminoacyl-tRNA biosynthesis；

判断干眼病治疗效果的标准为：待检测样本的Aminoacyl-tRNA biosynthesis代谢途径的的p＜0.05，则表明该人的干眼病的治疗效果很好，p＞0.05，则表明该人干眼病治疗效果较差；

色谱柱为Agilent Eclipse-plus C18 柱，规格为150 ×3.0 mm , 1.8 μm，进样量为3.00 μl，

柱温为40℃；流动相A为0.1%甲酸水溶液，B为100%乙腈；流动相的洗脱梯度如下：0min, 98.0% A; 1.0 min, 98% A; 5.0 min, 60% A; 12.0 min, 30% A; 15.0 min, 5%A; 20.0 min, 5% A；流动相的流速为 0.40 ml/min；

质谱检测使用Agilent 6550 iFunnel/Q-TOF质谱检测器，全扫描模式记录质荷比50-1000之间的离子的数据，扫描速度为2张谱图/秒；电喷雾离子源使用正极和负极两种离子化模式，毛细管电压为3.5kV，喷嘴电压正极时为250V、负极时为1500V，碰撞电压为380V，喷雾器压强为25 psi，鞘气和干气的流速分别为12 L/min和16 L/min，电荷注入检测器电压分别使用5V、10V、15V、20V、25V、30V、35V和 40V。

2.根据权利要求1所述的干眼病用眼泪代谢组学分析代谢途径变化的方法在判断干眼病治疗效果中的应用，其特征在于，所述正常人和干眼病患者眼泪样本均来自18-87岁人群。

3.根据权利要求1所述的干眼病用眼泪代谢组学分析代谢途径变化的方法在判断干眼病治疗效果中的应用，其特征在于：所述正常人眼泪样本为18个，干眼病患者眼泪样本为19个。

4.根据权利要求1所述的干眼病用眼泪代谢组学分析代谢途径变化的方法在判断干眼病治疗效果中的应用，其特征在于：所述图谱预处理方法包括对于多天研究时仪器日间调整的差异进行校正；在确保每天特定代谢物的中位数相同的条件下，各个样品中每个代谢物特征峰的数目需要除以其中位数进行标准化；数据标准化后，将缺失值使用最小值替代。