[发明专利]一种检测水产品中晚期糖基化终末产物的方法

说明书

本发明提出一种利用液相色谱串联质谱检测水产品中晚期糖基化终末产物(AGEs)的方法，包括如下步骤，步骤1：AGEs的提取；步骤2：制作标准曲线：以标准品的浓度值为横坐标，以标准品面积*(内标品浓度/内标品面积)作为纵坐标绘制标准曲线，得到方程；步骤3：将处理后的样品进行HPLC‑MS/MS检测，检测模式为MRM，得到样品中AGEs峰面积，求得样品中AGEs浓度。本发明目的在于建立一种液相色谱串联质谱方法，该方法可一次性检测3种AGEs(羧甲基赖氨酸CML、羧乙基赖氨酸CEL、甲基乙二醛氢咪唑酮MG‑H1)，具有分离度好、线性关系好、线性范围广等优点。

技术领域

本发明属于食品有害物质检测领域，尤其涉及一种检测水产品中晚期糖基化终末产物的方法。

背景技术

晚期糖基化终末产物(Advanced Glycation End-products，AGEs)是在非酶条件下，蛋白质、脂类或核酸等大分子物质的游离氨基与还原糖的醛基发生一系列反应生成的一种稳定化合物。医学研究结果表明，AGEs与人类诸多疾病的发生有密切关系，而膳食摄入是体内AGEs的重要来源。由于食品样难处理和AGEs种类繁多，结构复杂等原因，对于食品中AGEs的检测缺乏通用有效的方法。目前国内外测定AGEs的方法分为仪器法和免疫化学法，前者主要有荧光光谱法和色谱分析法，后者主要是酶联免疫法(ELISA)。荧光光谱法只适用于测定具有荧光性AGEs和单个AGEs组分的定量，酶联免疫法ELISA法对抗体的特异性和样品基质的特异性要求很高。色谱分析法具有高效、高灵敏度、高分辨率的特点，在检测生物样品和食品中的AGEs时与质谱仪串联使用，其灵敏度、选择性和速度会大大提高。色谱分析法中气相色谱-质谱法(GC-MS)需要复杂的衍生过程，因此液相色谱-质谱-质谱法(LC-MS/MS)成为了广大科研工作者的首选。现有技术中利用LC-MS/MS检测AGEs的方法仅能检测一种或两种AGEs组分，效率较低。

发明内容

本发明针对上述的技术问题，提出一种一次性检测水产品中3种AGEs组分(羧甲基赖氨酸CML、羧乙基赖氨酸CEL、甲基乙二醛氢咪唑酮MG-H1)的方法，进而对样品中AGEs做出较为全面准确的分析。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种检测水产品中晚期糖基化终末产物的方法，包括以下步骤：

步骤1：AGEs的提取；

1.1将样品溶于硼酸盐缓冲液和硼氢化钠溶液，防止后续处理过程导致样品发生还原反应产生AGEs；

1.2将样品进行酸解，使与蛋白结合的AGEs解离，转变成游离态AGEs；

1.3向样品中加入内标品以校正误差；

1.4将样品过固相萃取柱，纯化AGEs；

1.5将样品过滤膜以除掉杂质；

步骤2：制作标准曲线：以标准品的浓度值为横坐标，以标准品面积*(内标品浓度/内标品面积)作为纵坐标绘制标准曲线，得到方程；

步骤3：将处理后的样品进行HPLC-MS/MS检测，检测模式为MRM，得到样品中AGEs峰面积，求得样品中AGEs浓度。

作为优选，步骤1.1为每克冻干样品中加入20-25mL0.2 mol/LpH9.2的硼酸盐缓冲液和4-5mL2 mol/L用0.1mol/L氢氧化钠溶液配制的硼氢化钠溶液，4℃条件下反应8-10h。

作为优选，步骤1.2酸解条件为每克冻干样品中加入40-45mL6mol/LHCl，110℃酸解24-26h，氮吹浓缩至近干。