[发明专利]一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法

说明书

本发明公开了一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法，本发明其使用高效液相色谱仪、色谱分析柱和乙酸铵‑甲醇流动相进行测定，其测定方法具体包括以下步骤：S1、乙酸铵缓冲液的配制，S2、流动相的制备，S3、对照品储备溶液的配制，S4、对照品溶液的配制，S5、供试品溶液的配制，S6、测定，本发明涉及分析化学技术领域。该依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法,可通过简单的液相色谱测定，准确测定依诺肝素钠中苄索氯铵的残留含量，利用本发明提供的液相色谱检测方法，可以精确地检测出苄索氯铵的含量，本发明最低检出水平达到0.001％，在0.005％的残留水平能准确定量。

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，具体为一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留 的测定方法。

背景技术

依诺肝素钠是用于预防和治疗深静脉血栓或肺栓塞的抗凝血剂的一种低 分子量肝素，依诺肝素钠为白色或类白色粉末，无味，有引湿性，易溶于水， 不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。在水溶液中有强负电荷，能与一些阳离子结 合成分子络合物，水溶液在pH值7时较稳定，依诺肝素钠是由猪肠豁膜提取 的肝素钠经酯化后得到的肝素苄基酯钠衍生物通过碱裂解生成的低分子量肝 素钠，它由许多复杂的未定性的低聚糖组成，依诺肝素钠重均分子量在 3800-5000之间，分子量2000的低聚糖质量百分比在12％-20％之间，分子量2000-8000的低聚糖质量百分比在68％-82％，依诺肝素钠为低分子量肝素制剂， 可使抗凝血因子Ⅹa与Ⅱa活力的比值大于4，从而发挥很强的抗血栓形成功 能和一定的溶血栓作用，推荐剂量下总的凝血指标无明显变化，血小板聚集 时间及与纤维蛋白原的结合也无变化，尽管低分子量肝素(LMWH)适用于所 有分子量小于8000Da的肝素片段，但每一片段的效应仍取决于分子量，体 外将依诺肝素钠(分子量为4000～6000Da)和未分离肝素进行对比的研究显 示，根据各自的分子量，与未分离肝素的作用相比较，依诺肝素钠对凝血酶 的抑制作用降低约5倍，体内研究也显示皮下应用肝素，激活的部分凝血活 酶时间(APTT)显著长于皮下应用依诺肝素钠。

苄索氯铵是依诺肝素钠生产过程中使用的辅料，需要对依诺肝素钠成品 中苄索氯铵残留加以控制，与其他专利方法比较，目前未见有与本发明方法 相关的专利方法公开。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留的 测定方法，可以通过简单的液相色谱测定，准确测定依诺肝素钠中苄索氯铵 的残留含量。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种依诺肝素钠 中苄索氯铵残留的测定方法，其使用高效液相色谱仪、色谱分析柱和乙酸铵- 甲醇流动相进行测定，其测定方法具体包括以下步骤：

S1、乙酸铵缓冲液的配制：称取乙酸铵77g，精密称定，置1L烧杯中， 加冰乙酸60ml溶解，再加水940ml，混匀过滤；

S2、流动相的制备：量取300ml步骤S1配制的乙酸铵缓冲液和700ml甲 醇，置1L流动相瓶中，混匀，临用前超声脱气10min；

S3、对照品储备溶液的配制：称取苄索氯铵对照品9-10mg，精密称定， 置50ml容量瓶中，加相应乙酸铵缓冲液使溶解并稀释至刻度，摇匀即得；

S4、对照品溶液的配制：取步骤S3配制的对照品储备溶液1.0ml置50ml 容量瓶中，加乙酸铵缓冲液稀释至刻度，摇匀即得；

S5、供试品溶液的配制：称取供试品0.2g，精密称定，置10ml容量瓶中， 加相应乙酸铵缓冲液使溶解并稀释至刻度，摇匀即得，平行制备2份；

S6、测定：待系统稳定后，分别选取2份进样空白溶液、5份照品储备溶 液、2份供试品溶液和1份对照品溶液进行测定，苄索氯铵残留计算公式为