[发明专利]一种薄壳山核桃的微体嫁接方法

权利要求书

1.一种薄壳山核桃的微体嫁接方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）接穗的准备

在薄壳山核桃优良品种中，选取三年生嫁接苗带腋芽的茎段作为外植体，清洗后用70-75v%的乙醇溶液浸泡20-30s，无菌水冲洗后用0.05-0.1wt%的 HgCl₂溶液消毒处理10-15min，然后用无菌水冲洗，切成1cm长的茎段，接入腋芽诱导培养基进行培养，培养15-20d后，将产生的腋芽转入继代培养基进行培养，得到无根试管苗，选取无污染、无褐化现象，茎长2~4cm、带有叶片的、生长状况良好的无根试管苗作为接穗；

（2）砧木的培育

取成熟薄壳山核桃种子，用自来水冲洗后浸泡3 d，然后在无菌室内用70-75v%的乙醇溶液浸泡20-30s，无菌水冲洗后用0.05-0.1wt%的 HgCl₂溶液消毒处理10-15min，用无菌水冲洗后置于超净工作台上剥去果壳，剥取种仁放入0.1%HgCl₂溶液中进行消毒，从消毒过的种仁中切取种胚，将其竖直插入种胚诱导培养基，在21-25℃、空气相对湿度保持为70-80%、全黑暗的条件下进行培养，培养25-30d后，得到组培苗，作为砧木苗；

（3）微体嫁接

将砧木苗放于日光灯下炼苗5-10d，待浅红色嫩茎变成青绿色、顶部叶片展开时进行嫁接，先将砧木苗取出，切除胚芽的上部，保留胚轴以上2cm的部分作为砧木，在横切面的中央垂直下切，劈开砧木，切口深0.5-1cm，将接穗下端两侧对称切削，成一楔形，切口长0.5-1cm，然后将接穗插入砧木切口中，用保鲜膜包扎，即完成嫁接；嫁接后，将嫁接苗移至嫁接苗培养基上培养，待嫁接苗培养25d后解绑，开盖炼苗一周后移栽到栽培基质中；

步骤（1）中，腋芽诱导培养基的配方为：MS+2.0mg/L 6-BA +0.02mg/L IBA +30g/L 蔗糖+5.8g/L琼脂，pH值为5.8-6.0；

步骤（1）中，所述继代培养基配方为：改良DKW+1.0mg/L 6-BA+0.01mg/L IBA+5.8g/L琼脂+30 g/L蔗糖+0.1-1.0g/L抗褐化剂，pH5.8-6.0，抗褐化剂选自活性炭、聚乙烯吡咯烷酮或维生素C中任意一种；

步骤（2）中，种胚诱导培养基配方：改良DKW+2mg/L KT +1mg/L 6-BA +0.01mg/L IBA ，pH值为5.70-5.85；

所述改良DKW的配方为（mg/L)：硝酸铵1416.0，硼酸4.8，无水氯化钙112.5，硝酸钙1367.0，五水硫酸铜0.25，Na₂-EDTA 45.4，七水硫酸铁 33.8，硫酸镁 361.49，一水硫酸锰33.5，钼酸钠 0.39，六水硫酸镍 0.005，磷酸二氢钾 265.0，硫酸钾 1559.0，六水硝酸锌17.0，盐酸硫胺素 5.22，肌醇100，烟酸1.0；

步骤（3）中，所述嫁接苗培养基配方为：MS+6-BA 1mg/L+IAA 3.0mg/L，pH值为5.70-5.85。

2.如权利要求1所述薄壳山核桃的微体嫁接方法，其特征在于，步骤（1）中，采用0.1wt%的HgCl₂溶液消毒处理10min。

3.如权利要求1所述薄壳山核桃的微体嫁接方法，其特征在于，步骤（1）中，培养条件为：温度25℃±2℃，光照强度2400~2600lx，日光灯作为光源，光照时间14h/d，空气相对湿度为70-80%。

4.如权利要求1至3任一项所述薄壳山核桃的微体嫁接方法，其特征在于，步骤（3）中，所述栽培基质为河沙、重量比为1:1的珍珠岩与蛭石的混合物或重量比为1:1:1的珍珠岩、蛭石和腐殖土的混合物中的任意一种。