[发明专利]一种突触核蛋白病理性快动眼睡眠行为障碍模型的制备法

说明书

本发明涉及一种在非人受试动物中诱导可向帕金森表型转归的快动眼睡眠行为障碍(RBD)表型的方法，该方法包括1)向非人受试动物的单侧或双侧脑桥被盖背外侧下核(SLD)立体定向注射能够诱导突触核蛋白病理变化的物质；2)评估所述非人受试动物的RBD表型的诱导情况；3)在所述RBD动物中评估帕金森表型的诱导情况。本发明还涉及一种突触核蛋白病理性RBD模型的制备方法。本发明提出了通过向SLD核团立体定向注射可诱导突触核蛋白病理的预制纤维体(PFFs),借助于该纤维体“播散‑成核”的病理诱导特性从而构建可向帕金森表型转归的小鼠RBD模型，预期该模型可为未来研究中阐明RBD的病因、发病机制、帕金森转归及研发有效的阻断药物提供重要的动物模型基础。

技术领域

本发明涉及医学和生物技术领域。具体而言，本发明涉及基于脑桥被盖背外侧下核(SLD)突触核蛋白病理特征的可向帕金森表型转归的动物快动眼睡眠行为障碍(RBD)模型的制备方法。

背景技术

作为帕金森病重要的运动前症状，快动眼睡眠行为障碍(RBD)最早在运动症状出现前10年即可出现[1]，并且对原发性RBD病人持续随访发现随访10-15年时约有80-90％的病人转化为突触核蛋白病[2]。对原发性RBD病人的神经影像和尸体解剖研究也提示：该阶段病人已有纹状体多巴胺转运体功能降低、中脑黑质多巴胺能神经元丢失、蓝斑下核(subcoeruleus nucleus)MRI-SWI序列低信号及核团内部路易病理形成[3-5]。据此，从临床病理学角度来说：与帕金森病相同，原发性RBD也可归属为突触核蛋白病家族成员[6]。因而，如能在此阶段采取措施积极干预延缓或阻断RBD向帕金森病的转归不仅会对帕金森病的发病具有重要的早期预警意义，也将从根本上改变现有的帕金森病治疗格局。

成功构建能准确反映疾病外在症状表现和内在病理本质的动物模型是对临床疾病开展基础与临床研究的前提。对RBD发病机制的认识和动物模型的构建也经历了一个漫长的过程：20世纪50年代法国科学家Michel Jouvet首次发现电凝破坏脑桥被盖特定区域可诱导实验动物快动眼睡眠期(REM)睡眠期出现极类似于梦境演绎样的行为(dream-enactment behavior)，因而，由此做出“完整的脑桥被盖(intact pontine tegmentum)是REM睡眠发生和其间肌张力松弛状态维持的前提条件”的推测[7]。此后，经过一系列的深入研究，人们对于该“脑桥被盖REM睡眠调节区”的认识不断加深，最终将该目标核团定位于脑桥被盖背外侧下区并命名为：脑桥被盖背外侧下核(SLD)[8-10]。围绕该核团，研究人员先后使用机械破坏[7]、毒素毁损[11]和核团功能性神经元相关受体、转运体基因敲除或沉默[12-15]的手段诱导实验动物出现程度不等的RBD样行为,从而为本发明方案中提出的制备突触核蛋白病理特征性的RBD动物模型提供了技术可行性支持证据。

然而，以上列举的诸多现有RBD建模方案仍有很大的缺陷：1.早期使用的机械毁破坏和后来的神经毒素毁损法会不可避免地波及周边的脑区和核团，引入诸多不可预测的混杂因素，难以做到单一变量化、精准化，也不能体现RBD突触核蛋白病的病理本质；2.新兴的针对REM睡眠调控环路上关键受体、转运体的基因突变或基因沉默策略，虽可选择性地靶向操纵特定区域特定类型的神经元从而实现精准化及微创化，但该造模方法没有突触核蛋白病理因素的参与，也不能体现RBD突触核蛋白病的病理本质；3.上述RBD模型构建方案无论是机械破坏、毒素毁损还是REM环路受体、转运体基因沉默策略无一例外都是在短时间内甚至即时诱导动物出现RBD样行为，因而并不符合RBD这一慢性进行性退变的突触核蛋白病的病理生理特征。