[发明专利]副干酪乳杆菌ZFM54细菌素的分离纯化方法

权利要求书

1.一副干酪乳杆菌ZFM54细菌素的分离纯化方法，其特征在于，包括步骤：

（A）获取副干酪乳杆菌ZFM54；

（B）细菌素效价的测定；

（C）副干酪乳杆菌ZFM54产抑菌物质最适发酵条件的确定；

（D）发酵上清液的制备；

（E）大孔树脂吸附层析；

（F）离子交换色谱；

（G）凝胶过滤层析；以及

（H）制备型HPLC纯化，其中副干酪乳杆菌ZFM54的保藏号为CCTCC NO：M2016667，保藏单位：中国典型培养物保藏中心。

2.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌ZFM54细菌素的分离纯化方法，其进一步包括步骤：反相HPLC分析。

3.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌ZFM54细菌素的分离纯化方法，其进一步包括步骤：Tricine-SDS-PAGE方法检测细菌素的分子量。

4.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌ZFM54细菌素的分离纯化方法，其进一步包括步骤：BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

5.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌ZFM54细菌素的分离纯化方法，其中所述步骤（C）包括：确定发酵时间对ZFM54产抑菌物质的影响。

6.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌ZFM54细菌素的分离纯化方法，其中所述步骤（C）包括：确定发酵温度对ZFM54产抑菌物质的影响。

7.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌ZFM54细菌素的分离纯化方法，其中所述步骤（C）包括：确定接种量对ZFM54产抑菌物质的影响。

8.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌ZFM54细菌素的分离纯化方法，其中所述步骤（F）中：选择pH范围广的HiPrep XL SP阳离子柱进行分离。

9.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌ZFM54细菌素的分离纯化方法，其中所述步骤（G）中：选择分辨率是1000~5000 Da的Sephadex G-25凝胶柱对阳离子交换得到的活性组分进一步分离纯化。

10.根据权利要求9所述的副干酪乳杆菌ZFM54细菌素的分离纯化方法，其中所述步骤（H）中：将经Sephadex G-25凝胶柱层析分离纯化得到的活性成分在37℃旋转蒸发浓缩，用制备型C18反相高效液相色谱进一步分离纯化。