[发明专利]一种用于提取无内毒素质粒的磁性材料及其使用方法

说明书

本发明公开了一种用于提取无内毒素质粒的磁性材料及其使用方法，本发明通过将季铵盐阳离子化修饰到羟乙基纤维素表面，得到季铵盐阳离子化修饰的羟乙基纤维素。可以提取不含内毒素的质粒，使得内毒素大大减少，有利于后续实验的进行。相对于传统方法，更快捷，提取结果更可靠，易于在生产、科研等领域的推广和应用。

技术领域

本发明属于核酸提取技术领域，特别涉及一种用于提取无内毒素质粒的磁性材料及其使用方法。

背景技术

质粒DNA在不同领域有着重要的作用。质粒DNA中菌体内毒素、RNA以及蛋白质等多种杂质，会影响后续实验如细胞转染的效率，尤其是内毒素对细胞转染的影响极大。细菌内毒素是革兰氏阴性菌外膜上的特有结构，细菌生长或者死亡均能被释放出来，细胞破碎后更有大量的内毒素释放。内毒素会形成囊状结构，电荷性、疏水性等性能均与质粒DNA相似，质粒DNA纯化时给研究学者造成加大的困惑。

目前，内毒素去除方法主要有三种：一是基于离子交换，利用核酸和内毒素等电点的差异，搭配特殊的试剂，去除溶液中的内毒素，典型的商品化试剂包括Qiagen公司的EndoFree Plasmid Purification Kit，但是基于离子交换柱（重力柱）的方法去除效率较低；

二是选择性吸附。多粘菌素B（polymyxin-B，PMX-B）是一种环状亲脂性抗生素，有10 个氨基酸的多肽，其中7 个氨基酸形成环状化合物，在N-端连接一个脂肪链。一般认为多粘菌素B 是通过本身的阳离子与内毒素活性部位磷脂A 的阴离子相结合，其作用还包括静电作用、离子作用、亲水作用和其他分子之间的相互作用。环糊精是环状聚糖，呈管状结构。γ环糊精含8个单糖，内径0. 85 nm，外侧亲水，内部疏水。脂多糖疏水链距离约0. 49nm，环糊精可以包裹脂多糖。由于分子筛效应，环糊精不吸附DNA。通过其他分子共聚修饰，可以提高环糊精吸附效率。

三是Triton X-114法。Triton X-114是一种非离子表面活性剂。其浊点为23 ℃，在低于该温度时，Triton X-114能与水互溶；当高于该温度时，则分离成水相和表面活性剂相，基于该特点，可以实现内毒素的分离。

根据现有问题，找出一种简单、高效去除内毒素的方法称为亟需解决的问题。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种提取无内毒素质粒的磁性材料。

本发明的又一目的在于提供上述磁性材料的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述磁性材料的应用。

为达到上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一方面，提出了一种提取无内毒素质粒的磁性粒子。根据本发明的实施例，所述磁性粒子外表面修饰有羟乙基纤维素，所述羟乙基纤维素修饰有季铵盐。本发明的季铵盐基团，可以在一定条件下提取不含内毒素的质粒。而且基于离子交换原理，通过制备具有离子交换功能的磁珠，搭配本发明其他试剂，可实现无内毒素质粒的提取。

根据本发明的实施例，所述季铵盐选自环氧丙基三甲基氯化铵。

本发明的第二方面，提出了磁性粒子的制备方法，包括以下步骤：

1）将表面经季铵盐阳离子化修饰的羟乙基纤维素溶解为A液；六水合氯化铁、四水合氯化亚铁溶解为B液；

2）A液和B液混合，通入惰性气体后水浴；

3）加氨水后水浴；

4）透析；

5）离心后取上清为磁性粒子。

根据本发明的实施例，六水合氯化铁、四水合氯化亚铁主要是为了添加磁性。

根据本发明的实施例，惰性气体选自氩气、氮气。惰性气体为了隔离氧气。