[发明专利]硫酸化岩藻寡糖作为PCSK9抑制剂的应用

说明书

本发明公开了硫酸化岩藻寡糖作为PCSK9抑制剂的应用。本发明首次发现硫酸化岩藻寡糖能显著抑制PCSK9蛋白的表达，为硫酸化岩藻寡糖在制备PCSK9抑制剂药物上的应用提供了详实的实施案例。在本发明的实施例中，不同来源的硫酸化岩藻寡糖可显著下调apoE(‑/‑)小鼠，C57BL/6小鼠和细胞中PCSK9蛋白表达水平；在制备方面，本发明的实施方法简单易于大规模生产，为该发明的转化奠定了基础。

技术领域

本发明涉及一种化合物的医药用途技术领域，具体为一种硫酸化岩藻寡糖作为PSCK9抑制剂的应用。

背景技术

心血管疾病是一种高发病率、高致残率、高致死率的疾病。据2019年发表的2017年全球人类死亡的致病因素中，心血管疾病以31.8%的比例遥遥领先于癌症等其他疾病。2019年发布的我国心血管情况更加瞩目，心血管疾病占据了2016年疾病的40%。因此，心血管疾病是全球，特别是发展中国家人口比较重要的公共卫生问题。

高血脂是诱发动脉粥样硬化的主要原因之一。当体内胆固醇过高，特别是低密度脂蛋白水平（LDL-C）以及甘油三酯增高时，氧化的LDL或其他变性脂蛋白则可被巨噬细胞吞噬，进而沉积在动脉内皮下，引起内皮下脂质沉积，进而在动脉内膜形成脂斑，最后，血管壁隆起、向官腔内突起形成粥样斑块。

2003年至今的研究表明：前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(PCSK9)在调节胆固醇体内平衡中起重要作用；其可与低密度脂蛋白受体(LDLR)结合，在细胞内外促进LDLR降解，致使血液中LDL不能被有效地清除，从而导致高胆固醇血症。目前，上市的PCSK9单克隆抗体抑制剂价格高昂，且“花费-受益”极其不对称，这让绝大多数患者无法承担。

发明内容

本发明涉及一种化合物的医药用途技术领域，具体为一种硫酸化岩藻寡糖作为PSCK9抑制剂的应用。

本发明解决以上问题，采用的技术手段为：硫酸化岩藻寡糖作为PSCK9抑制剂的应用。

所述硫酸化岩藻寡糖的结构式如下：

取代基W，X，Y和Z 可以是，H, SO₃^2-, 硫酸化的单糖，非硫酸化的单糖，硫酸化的糖醛酸，非硫酸化的糖醛酸。

所述硫酸化岩藻寡糖类化合物的分子量分别为：200-2000 Da。

所述硫酸化岩藻寡糖提取自褐藻或棘皮动物，褐藻为泡叶藻、海带，棘皮动物为海参。

所述硫酸化岩藻寡糖的制备方法包含有如下步骤：

（1）岩藻多糖粗品提取：泡叶藻、海带或海参清洗除去泥沙，浸泡除盐，粉碎机粉碎，烘干，再次粉碎，过筛。在粉碎干燥物中加入3-10倍体积的石油醚或乙酸乙酯，90-95℃冷凝回流除去大部分色素、脂质。滤渣干燥，研磨，采用水提法或木瓜蛋白酶法提取得岩藻多糖粗品；

（2）岩藻聚糖的制备：上步制得的岩藻多糖粗品先经阴离子交换柱，采用ÄKTApure 150进行分离纯化，0-2mol/L的氯化钠线性洗脱，收集峰对应组分，经浓缩、透析、冷冻干燥得岩藻聚糖半成品，上述岩藻聚糖半成品再经凝胶柱层析，即可分离得到岩藻聚糖成品，经液相色谱分析确定其为岩藻聚糖；

（3）硫酸化岩藻寡糖的制备：在上述步骤制得的岩藻聚糖配制成浓度为4-5mg/mL的溶液，在其中加入酸，使酸的终浓度为0.4-0.5mol/L， 50-70℃搅拌过夜；次日，加入碱中和后，加入90-100%乙醇至乙醇的终浓度达65-80%；3000-5000×g离心去除沉淀，收集上清液，旋转蒸发仪蒸干；重溶于去离子水中，上样柱层析，结合苯酚硫酸法或示差折光检测器收集各寡糖组分；所获得的寡糖组分，经液相色谱法确定单糖组成，合并收集，质谱法确证硫酸化岩藻寡糖的结构。