[发明专利]一种Trizol快速提取核酸DNA和/或RNA的方法

说明书

本发明公开了一种使用Trizol试剂快速提取核酸DNA和/或RNA的方法，可采用Trizol试剂和收集柱对样品进行DNA和RNA的分别提取或同时提取，相比于使用Trizol提取RNA和DNA的经典方法，提取时间短，稳定性好，可以满足不同试验对DNA和RNA的不同要求，非常有利于对材料中的DNA和RNA病原进行检测，同时也可以减少材料使用，对难得材料尤其重要。本发明提供的Trizol快速提取核酸DNA和/或RNA的方法，对于分子生物学试验具有重要的实用性。

技术领域

本发明涉及核酸提取技术领域，具体涉及一种Trizol快速提取核酸DNA和/或RNA的方法。

背景技术

Trizol试剂可以快速提取人、动物、植物、细菌不同组织的总RNA，该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×10⁶)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>10⁷)均有较好的分离效果。Trizol试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。Trizol试剂抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。并且利用DNA、RNA和蛋白质在不同溶液中的溶解性质，可以通过分层分别将不同层中的RNA(上层)、DNA(中层)、蛋白质(下层)分离纯化出来，效率极好。

然而，在Trizol试剂提取RNA的过程中，需要长时间离心进行核酸沉淀，沉淀在去除上清的时候还容易丢掉，造成提取效果的稳定性差。在提取DNA的过程中，除了上面的问题之外，还需要使用柠檬酸钠乙醇溶液反复洗涤，每次洗涤时间长(30min)，费时费力。

发明内容

本发明的目的是提供一种使用Trizol试剂和收集柱简单快速对样品进行DNA和RNA的分别提取或同时提取的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种Trizol快速提取核酸DNA和/或RNA的方法，其特征在于，

1)同时提取DNA和RNA时包括以下操作步骤：

(1)取小于50mg新鲜材料置于研磨器中，加入0.5mL Trizol试剂，快速研磨粉碎，然后转移到1.5mL去RNA酶的离心管中，不断颠倒混匀，直至溶液清亮，其中新鲜材料包括组织、细胞、血液、血浆、分泌物、培养液中的任意一种；

(2)加入600μL分离液，其中分离液由100-200μL氯仿、100-300μL乙醇、100-200μL异丙醇组成，振荡混匀；

(3)将振荡混匀后的溶液分两次转移到已放入收集管的收集柱内12000rpm离心1min，每次离心后倒掉收集管中的液体；

(4)向收集柱中加入600μL的纯化液1，其中纯化液1包括0.05-0.3M柠檬酸钠、5％-30％乙醇的DEPC水，12000rpm离心处理1min，倒掉收集管中的液体，然后再向收集柱中加入600μL的纯化液1，12000rpm离心处理1min，倒掉收集管中的液体；

(5)向收集柱内加入500μL的纯化液2，其中纯化液2位含70％-80％乙醇的DEPC水，12000rpm离心处理2min；

(6)小心取出收集管，将收集柱转移到一个新的离心管中，加入100μL DEPC水溶解10min后，12000rpm离心2min，得到含有DNA和RNA的核酸溶液；

2)提取RNA时包括以下操作步骤：

(1)取小于50mg新鲜材料置于研磨器中，加入0.5mL Trizol试剂，快速研磨粉碎，然后转移到1.5mL去RNA酶的离心管中，不断颠倒混匀，直至溶液清亮，其中新鲜材料包括组织、细胞、血液、血浆、分泌物、培养液中的任意一种；