[发明专利]一种固相合成Alloferon-2的方法

说明书

本发明公开了一种固相合成Alloferon‑2的方法，属于医药技术领域，所述方法包括以下步骤：1)首先向反应器中投加二氯树脂作为固相载体，而后加入第一个氨基酸，以DCM做溶剂，加入DIEA反应一段时间；2)步骤1)反应结束后DMF洗涤，加入试剂封闭未反应的‑OH；3)向步骤2)处理后的树脂中加入哌啶DMF溶液进行脱保护；4)将下一个氨基酸和HOBT的混合物投入至反应器中，加入DIC反应一段时间；5)加入哌啶DMF溶液脱保护，重复上述步骤直至延伸结束，完成多肽粗品的合成；6)向所述的多肽粗品中加入切割液，恒温震荡一段时间，乙醚离心，得到粗产物。本发明的固相合成方法合成多肽产率高，重现性好，操作简单，利于推广。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体的说，涉及一种固相合成Alloferon-2的方法。

背景技术

多肽通常指10-100个氨基酸脱水缩合形成的小分子，具有不同的生物活性，且来源广泛。最常见的是从陆生动物，海洋动物等提取多肽或化学方法合成多肽。目前已有60多种肽类药物上市，并有数百种新型治疗肽正在临床前和临床开发中。这一成功的关键因素是肽的高效、特异、安全的作用模式。因此，多肽药物的蓬勃的发展将于天然分子取得突破，并人工辅助。可应用传统的合理设计来改善它们的弱点，例如它们的化学和物理特性。海洋生物活性肽来源广泛，是多孔动物门、刺胞动物门、脊索动物门、刺皮动物门以及海洋真菌和细菌等在海底进行免疫不可或缺的部分。海兔毒素10是从海洋软体动物截尾海兔中分离提取的由4个氨基酸组成的线性缩肽类天然毒性蛋白。海兔毒素10及其衍生物可以抑制细胞有丝分裂，具有很强的抗肿瘤活性，已进入临床研究阶段。文蛤中富含的牛磺酸能够达到抗肿瘤的目的。李祺福等从中国鲎细胞中提取鲎素对人胃癌BGC-823细胞增殖的抑制作用。郭思政等发现鱼卵小分子多肽对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖作用。

陆地动植物中同样含有多种肽，比如一种从蝎子的毒液中提取的36个氨基酸的多肽，对胶质瘤、黑色素瘤、小细胞肺癌、神经母细胞瘤、髓母细胞瘤等肿瘤细胞具有靶向性。Alloferon-2是一种从双翅目丽蝇血液中提取出来的12个氨基酸的小分子多肽，其氨基酸序列为GVSGHGQHGVHG。现有研究资料表明，体外实验中，该肽对NK淋巴细胞具有刺激作用，在体内实验中，经该肽处理后，在小鼠体内诱导细胞因子产生。此外，小鼠体内实验表明，该多肽具有抗病毒和抗肿瘤的能力，这些结果表明该肽具有免疫调节特性和抗病毒效果。

虽然天然提取的多肽具有较好的医药价值已被证实，然而采用天然提取的方式存在产量低，难获取的缺陷，因此采用固相合成的化学方法合成目标多肽成为有效获取多肽的有效手段。然而固相合成法也存在收率低，收率难以控制的问题，如何能够得到操作简单，产率高的合成方法是现有技术存在的难题。

发明内容

1.要解决的问题

针对现有技术中采用天然提取方式获得Alloferon-2多肽产量低，难以获取的缺陷，本发明提供了一种操作步骤简单，合成产率高的固相合成Alloferon-2的制备方法。

2.技术方案

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

本发明提供了固相合成多肽Alloferon-2的方法，该多肽的英文名称为Alloferon-2，分子式为C₄₆H₆₉N₁₉O₁₅，氨基酸序列为：Gly-Val-Ser-Gly-His-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly。

该Alloferon-2的合成方法，具体包括以下步骤：

1)首先向反应器中投加二氯树脂作为固相载体，加入第一个氨基酸，以DCM做溶剂，加入DIEA反应一段时间；

2)步骤1)反应结束后DMF洗涤，加入试剂封闭未反应的-OH；