[发明专利]检测沼虾黄病毒-1的特异性引物、探针及快速检测试剂盒

说明书

检测沼虾黄病毒‑1的引物探针混合液，由引物组A和Taqman荧光探针B组成，Taqman荧光探针B的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；所述引物组A包含引物MrFV‑q150F和引物MrFV‑q150R；所述引物MrFV‑q150F的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述引物MrFV‑q150R的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述Taqman荧光探针B的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。一种沼虾黄病毒‑1荧光定量检测试剂盒，具有权利要求所述的混合液，还具有RT‑qPCR反应液、阳性质控品、阴性质控品，所述RT‑qPCR反应液为探针法荧光定量一步法RT‑qPCR反应液，所述阴性质控品为灭菌生理盐水，所述阳性质控品是含有沼虾黄病毒‑1聚合酶基因的载体。本发明用于检测沼虾黄病毒‑1，速度快，特异性强。

技术领域

本发明属于靶RNA片段的快速检测领域，具体地说，涉及一种检测沼虾黄病毒-1的特异性引物、探针及快速检测试剂盒。

背景技术

沼虾黄病毒-1(Macrobrachium rosenbergii Flavivirus-1，MrFV-1)是引起养殖期沼虾，特别是罗氏沼虾长不大的病毒性病原，常引起罗氏沼虾“病毒性铁虾征”，造成养殖期罗氏沼虾性腺早熟，对养殖罗氏沼虾产量造成巨大损失，该病毒由于易造成沼虾特定细胞细胞质空泡化病变，所以又称其为空泡病毒。MrFV-1为单链RNA病毒，该病毒可感染罗氏沼虾幼体和成虾。罗氏沼虾“病毒性铁虾征”最早发生于2011年嘉兴秀洲区某罗氏沼虾养殖场，因发病症状为公虾蓝色长螯，母虾过早抱卵，生长退壳缓慢，被称为“铁虾”、“干部虾”、“长爪病”等。根据流行病学调查，发现该病毒存在于生长缓慢的罗氏沼虾中，感染试验表明，沼虾黄病毒-1可导致罗氏沼虾生长缓慢。此外该病毒还可感染日本沼虾，也可引起日本沼虾特定细胞的空泡化病变。病毒性铁虾征连续多年在我国各大罗氏沼虾养殖场发生，并可通过带毒种虾进行垂直传播，这给我国的罗氏沼虾育苗和养殖产业造成的经济损失无法估量。根据发现的该病毒的基因组序列，与已报道的黄病毒序列相似性低于40％，表明是一种新的黄病毒科的病毒。该病毒在国内外未见报道，其基因组序列也为公开，至今也未有检测试剂盒和检测方法，因此，本试剂盒的研制与开发，具有创新性和唯一性。该病毒检测试剂盒的开发和应用也会对该病毒引起的罗氏沼虾病害起到预警和提前防控作用。

发明内容

有鉴于此，本发明针对上述问题，首先公开了沼虾黄病毒-1的部分基因组序列，并提供了一种检测沼虾黄病毒-1的特异性引物、探针及快速检测试剂盒，本发明的引物、探针和试剂盒特异性强，敏感性高，能实现快速、有效且准确检测沼虾黄病毒-1；本发明的试剂盒为一步法荧光定量检测试剂盒，该试剂盒可在封闭的情况下判断结果，扩增产物不会对检测环境造成污染，可用于沼虾黄病毒-1病的监测和早期预防，也可用于无黄病毒-1罗氏沼虾种虾的筛选。本发明采用荧光定量技术，通过检测沼虾黄病毒-1的膜蛋白基因，来间接检测沼虾黄病毒-1的携带情况，这是目前国内外首次研制检测沼虾黄病毒-1的试剂盒；该试剂盒的研制为沼虾黄病毒-1病的监测和预防奠定基础。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种检测沼虾黄病毒-1的引物探针混合液，其特殊之处在于所述混合液由引物组A和Taqman荧光探针B组成，探针B的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团，所述引物组A和探针B是根据本发明人发现的沼虾黄病毒-1的序列设计的；

所述引物组A包含引物MrFV-q150F和引物MrFV-q150R；

引物MrFV-q150F的核苷酸序列为：

SEQ ID NO：1—5’-TGGCAAACTCTTAGGATTC-3’

引物MrFV-q150R的核苷酸序列为：

SEQ ID NO：2—5’-ACTGCACAATAGTCTTCG-3’

所述Taqman荧光探针B的核苷酸序列为：