[发明专利]检测沼虾黄病毒-1的特异性引物、探针及快速检测试剂盒

权利要求书

1.检测沼虾黄病毒-1的引物探针混合液，其特征在于所述混合液由引物组A和Taqman荧光探针B组成，Taqman荧光探针B的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；

所述引物组A包含引物MrFV-q150F和引物MrFV-q150R；

所述引物MrFV-q150F的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

所述引物MrFV-q150R的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

所述Taqman荧光探针B的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

2.根据权利要求1所述的混合液，其特征在于，所述荧光报告基团选自6-羧基荧光素、六氯-6-甲基荧光素、VIC荧光染料、四氯-6-羧基荧光素、羧基-X-罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、磺酰罗丹明、6-羧基-4’，5’-二氯-2’，7’-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯、花菁3、花菁3.5、花菁5、花菁5.5中的一种；所述荧光淬灭基团选自6-羧基四甲基罗丹明、4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、黑洞淬灭剂1、黑洞淬灭剂2、黑洞淬灭剂3中的一种。

3.根据权利要求1所述的混合液，其特征在于，所述荧光报告基团为6-羧基荧光素，所述荧光淬灭基团为黑洞淬灭剂1。

4.一种沼虾黄病毒-1荧光定量检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒具有权利要求1、2或3所述的混合液，还具有RT-qPCR反应液、阳性质控品、阴性质控品，所述RT-qPCR反应液为探针法荧光定量一步法RT-qPCR反应液，所述阴性质控品为灭菌生理盐水，所述阳性质控品是含有沼虾黄病毒-1膜蛋白基因的载体。

5.一种如权利要求4所述的试剂盒在制备检测沼虾黄病毒-1产品中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

采用商业RNA提取试剂盒提取的待检罗氏沼虾样品的总RNA，再将3uL RNA加入到含所述混合液和所述RT-q PCR反应液的PCR管中，混匀后进行一步法RT-qPCR，反应条件：42℃20-30分钟，95℃5-8分钟，95℃10-15秒钟，60℃30-40秒钟，共38-42个循环；荧光信号收集设定为6-FAM，60℃反应末；

结果判断：检测通道不出现S型扩增曲线，判为沼虾黄病毒-1阴性；检测通道出现S型扩增曲线，且Ct值≤35，判为沼虾黄病毒-1阳性；检测通道出现S型扩增曲线，且Ct值35时，需重新进行检测，若仍然Ct值35时，则判为沼虾黄病毒-1阴性。