[发明专利]一种液相色谱串联质谱定量检测意蜂蜜中α-葡萄糖苷酶的方法

权利要求书

1.一种液相色谱串联质谱定量检测意蜂蜜中α-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，包括：通过液相色谱串联质谱法检测待测蜂蜜中α-葡萄糖苷酶的特征肽段，所述特征肽段包括肽段:

特征肽段1：SISNNEQVK，用于定量，

特征肽段2：IYTHDIPETYNVVR，用于定性;

在检测之前用检测试剂盒处理所述待测蜂蜜，所述检测试剂盒由以下成分组成:

（1）提取缓冲液0.01 m/L PBS，pH 7.4；

（2）胰蛋白酶20 ng/μL，溶剂为40mM碳酸氢氨；

（3）特征肽段1、2的标准品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：

A、配制含有固定浓度的稳定同位素内标肽段的不同浓度的特征肽段标准品溶液，进入液相色谱串联质谱检测并绘制标准曲线；

B、提取所述待测蜂蜜中的蛋白质，用胰蛋白酶进行酶切，对酶解产物除盐后作为待测样本；

C、向所述待测样本中添加所述稳定同位素内标肽段使其浓度与步骤A中的浓度相同，采用步骤A中相同方法进行液相色谱串联质谱检测；

D、对照步骤A所得标准曲线，获得所述待测样本中特征肽段的浓度，从而实现对α-葡萄糖苷酶的定量检测。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤A和C中采用三重四级杆或Q Exactiveplus液质联用仪进行液相色谱串联质谱检测。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，以SISNNEQVK为定量特征肽段，其在质谱中所产生的检测信号的母离子具有509.76182的质荷比，包含质荷比为713.36824、818.40027的子离子，检测允许偏差在10 ppm以内。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述稳定同位素内标肽段为：SISNNEQVK*，其中，K*表示赖氨酸中的碳置换为¹³C，氮置换为¹⁵N；

所述稳定同位素内标肽段在质谱中产生的检测信号的母离子为m/z: 513.76642，包含质荷比为1088.52023、858.45036的子离子。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤A得到的标准曲线为Y=0.00982X-0.000624，R²=0.9983，其中，Y为特征肽段/稳定同位素内标肽段的峰面积比，X为特征肽段的浓度；检测范围为10-1000 ng/mL，最低检出限为5 ng/mL。