[发明专利]一种清热养阴活血祛瘀口服液成分分离及鉴别方法

说明书

本发明公开了一种清热养阴活血祛瘀口服液成分分离及鉴别方法，包括清热养阴活血祛瘀口服液供试品溶液的成分分离：取脉络宁口服液，调节pH值至6～8，取不超过1倍柱体积上聚苯乙烯/二乙烯苯固相萃取小柱，用1～3倍柱体积水抽洗，直至抽干，弃去水液，依次用2～3倍柱体积20％甲醇、1～3倍柱体积40％甲醇、1～3倍柱体积60％甲醇、1～3倍柱体积甲醇抽洗，每次均抽干，收集各洗脱液；取20％甲醇洗脱液进行牛膝鉴别，取40％甲醇洗脱液进行山银花鉴别，取60％甲醇洗脱液进行金银花鉴别，取甲醇洗脱液进行石斛鉴别。本发明操作方便、快速准确、特征性强、耐用性良好，可以作为评价清热养阴活血祛瘀口服液质量的有效方法。

技术领域

本发明属于食品、保健品、药品及医疗领域，涉及一种清热养阴活血祛瘀口服液成分分离及鉴别方法。

背景技术

脉络宁口服液由金银花、山银花、石斛、牛膝、玄参等5味药材制成，具有清热养阴、活血化瘀的作用。用于血栓闭塞性脉管炎、动脉硬化性闭塞症、脑血栓形成及后遗症、静脉血栓形成等病。药理研究显示：脉络宁口服液具有保护心、脑血管组织、抗血栓形成、改善微循环及改善血液流变性等作用。

脉络宁口服液的药学研究相对比较薄弱，质量标准所载薄层色谱鉴别方法中指标性成分的特征性较弱。2010年版《中国药典》将金银花、山银花单列，脉络宁口服液中含有金银花、山银花，仅以绿原酸作为指标性成分来鉴别金银花药材已无法符合现行药典要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分分离及鉴别方法，选择β-蜕皮甾酮为指标性成分进行牛膝药材的薄层色谱鉴别，选择灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙为指标性成分进行山银花药材的薄层色谱鉴别，选择木犀草苷为指标性成分进行金银花药材的薄层色谱鉴别，选择石斛酚为指标性成分、采用高效液相色谱法进行石斛药材的鉴别。

发明人采用聚苯乙烯/二乙烯苯固相萃取小柱(规格500mg/6mL，即柱体积6mL；上样前预处理：分别用甲醇和水各18mL抽洗，直至抽干)对脉络宁口服液进行洗脱分离。脉络宁口服液质量标准中pH值规定的范围为5.0～7.0，不同批次的脉络宁口服液的pH值存在一定的差异。针对固相萃取技术，目标物必须完全离子化才可以保证其被吸附剂完全吸附保留，而目标物的离子化程度则与pH值有关。为减少不同批次脉络宁口服液经聚苯乙烯/二乙烯苯固相萃取小柱洗脱后结果的差异，在洗脱前调节脉络宁口服液的pH值为6～8，优选为7。金银花对照药材和山银花对照药材也需经聚苯乙烯/二乙烯苯固相萃取小柱洗脱，为确保和脉络宁口服液洗脱成分的一致性，在洗脱前调节两者提取液的pH值为6～8，优选为7。

发明人分别选取20％甲醇、40％甲醇、60％甲醇、甲醇等溶剂进行洗脱，并对各溶剂的洗脱体积和洗脱成分进行筛选：

脉络宁口服液洗脱液中β-蜕皮甾酮考察

取脉络宁口服液适量，用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7，取5mL上聚苯乙烯/二乙烯苯固相萃取小柱，用6mL水抽洗，直至抽干，弃去水液；用18mL 20％甲醇分三次抽洗，每次6mL；继续用18mL 40％甲醇分三次抽洗，每次6mL；每次均抽干，收集各洗脱液。分别吸取β-蜕皮甾酮对照品溶液、各洗脱液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，晾干，显色，见图1。表明，20％甲醇第一次洗脱液中明显可见与对照品色谱相应的斑点，20％甲醇第二次洗脱液中的色谱斑点较弱，而20％甲醇第三次洗脱液及40％甲醇三次洗脱液中均未见与对照品色谱对应的斑点，故采用6～12mL，优选采用12mL20％甲醇洗脱，洗脱液浓缩后制得溶液作为鉴别牛膝药材的供试品溶液。

脉络宁口服液洗脱液中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙考察