[发明专利]基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法

权利要求书

1.一种基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)向小鼠心脏灌注后取出小肠；然后将小肠组织置于质量分数为3～5％的多聚甲醛溶液中固定6～24h；

2)用0.05～0.2M的PBS缓冲液对固定后的小肠组织进行漂洗20～60min；漂洗2～4次；

3)将小肠组织分别置于不同体积分数的乙醇溶液中进行脱水；

4)然后将脱水的小肠组织置于无水乙醇配置浓度0.1～0.3μg/mL Dil工作液中，在超声条件下进行超声处理；

5)将小肠组织置于无水乙醇中超声漂洗，重复2～4次；

6)将小肠组织置于二甲苯，透明1～3次，每次0.5～2h；

7)将石蜡块放在真空泵加热到65～70℃，经双层滤纸过滤，将透明好的小组织浸在过滤后的石蜡中3～5h，抽真，然后进行缓慢降温；

8)将制作好的石蜡包埋样品置于在0.05～0.2M的PBS缓冲液水槽中，利用TDI～fMOST相机进行采集。

2.根据权利要求1所述基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于：所述步骤1)中，多聚甲醛溶液的质量分数为4％，固定时间12h。

3.根据权利要求1所述基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于：所述步骤2)中，PBS缓冲液的浓度为0.1M，漂洗时间为30min；漂洗3次。

4.根据权利要求1所述基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于：所述步骤3)中，将小肠依次置于体积分数为50％、75％、95％的乙醇溶液中，脱水1h。

5.根据权利要求1所述基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于：所述步骤4)中，超声波的功率密度为1.00W/cm²～1.50W/cm²,频率为28kHz～43kHz；超声处理的时间为1～3h。

6.根据权利要求5所述基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于：所述步骤4)中，超声波的功率密度为1.50W/cm²,频率为35kHz；超声处理的时间为2h。

7.根据权利要求1所述基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于：所述步骤5)中，超声波的功率密度为1.00W/cm²～1.50W/cm²,频率为28kHz～43kHz；超声处理的时间为1～3h。

8.根据权利要求1所述基于Dil超声染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于：所述步骤5)中，超声波的功率密度为1.50W/cm²,频率为35kHz；超声处理的时间为2h。