[发明专利]一种同时测定血清中脂溶性维生素和类胡萝卜素的方法

权利要求书

1.一种同时测定血清中脂溶性维生素和类胡萝卜素的方法，其特征在于，包括：以离子液体或离子液体与有机溶剂组成的二元复合溶剂作为萃取剂，经液-液萃取法对血清进行前处理，选取维生素A醋酸酯和反式-β-阿朴-8′-胡萝卜醛分别作为脂溶性维生素和类胡萝卜素的内标物，对得到的离子液体萃取相进行高效液相色谱分析，测得血清中脂溶性维生素和类胡萝卜素的含量；

所述离子液体由阳离子M⁺和阴离子N^-两部分组成，其中阳离子M⁺为具有单个或多个取代基的咪唑、吡啶、哌啶、吡咯烷、胺类和磷酸类阳离子中的一种，所述的取代基为烷基、烯烃基或芳烃基；阴离子N^-为四氟硼酸根、六氟磷酸根和双（三氟甲烷磺酰）亚胺根疏水性阴离子中的一种；

有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、乙酸乙酯、正丁醇、正庚醇、正辛醇、正戊烷、正己烷、正庚烷、正辛烷、环戊烷、环己烷、沸程为60～90℃石油醚、沸程为90～120℃的石油醚或甲苯；

液-液萃取是按照每250 μL血清加入50~500 μL的萃取剂的比例对血清进行前处理；

所述高效液相色谱分析条件如下：

固定相为YMC C30色谱柱，4.6mm×250mm, 5 μm；

流动相A为体积分数90%以上的甲醇水溶液，流动相B为体积分数30%以上的异丙醇/正己烷溶液；

洗脱方式为梯度洗脱，流速为1mL/min；

检测波长包括：

324nm维生素A；

263nm维生素D；

290nm生育酚；

254nm维生素K；

450nm类胡萝卜素；

柱温为25℃，进样量10μL；

脂溶性维生素和类胡萝卜素的同时检测在40分钟内完成，且脂溶性维生素和类胡萝卜素的液-液萃取回收率为50%~95%；

所述脂溶性维生素为维生素A、25-羟基维生素D₃、α-生育酚和γ-生育酚；所述类胡萝卜素为叶黄素、玉米黄素、β-隐黄质、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素和番茄红素。

2.根据权利要求1所述的同时测定血清中脂溶性维生素和类胡萝卜素的方法，其特征在于，所述二元复合溶剂中离子液体的摩尔百分比为1%～90%。