[发明专利]一种透明质酸检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及医学分析技术领域，具体涉及一种透明质酸检测试剂盒及检测方法。该试剂盒包括结合HA衍生物的固相载体，HA结合蛋白，酶标记的HA结合蛋白抗体；所述HA衍生物由HA的末端与偶联蛋白偶联而成。本发明试剂盒准确性好、灵敏度高、特异性好、检测速度快，40分钟可出结果。本发明试剂盒与肝活检结果符合度极高，克服了放免试剂和酶免试剂的诸多不足，适于在产业上有效地推广应用，同时稳定性好，2‑8℃可稳定存放一年。

技术领域

本发明涉及医学分析技术领域，具体涉及一种透明质酸检测试剂盒及检测方法。

背景技术

透明质酸(HA)广泛分布于细胞外间隙，是由重复的二糖单位组成的线状多聚体，分子量为10～10000kD。

HA主要由组织中纤维母细胞合成，通过淋巴系统进入血循环，并由肝脏快速清除。肝内皮细胞是HA摄取、降解的场所。HA在循环中的半衰期是2.5～5.5min。由于体内存在有效的HA清除机制，因此，正常人血清中仅有低水平的HA。多种原因导致的肝病均可使血清HA水平上升，主要与肝脏清除功能下降、肝脏内成纤维细胞(肝星状细胞)合成增加有关。在肝纤维化时，肝星状细胞合成HA水平大大升高，且内皮细胞清除HA能力亦有下降，双重原因导致肝纤维化中HA水平上升。

肝纤维化的形成是由于肝脏控制基质形成与沉积和基质降解与清除之间平衡的丧失，从而引起结缔组织的过度沉积进而纤维化。肝纤维化是慢性肝病的共同病理学基础，随着各种不同的慢性肝脏疾病的进展可逐渐形成肝纤维化。

就目前的临床研究而言，HA是目前众多纤维化生化指标中最为敏感和特异的指标(80％以上)，若与其他指标联合应用，其诊断敏感度和特异性可进一步提高。因此，透明质酸的定量检测对监测人体肝脏纤维化的发生及预后都有重要意义。

目前临床常用的透明质酸检测方法有Elisa测定、放射免疫测定、化学发光免疫。Elisa测定方法一般用于半定量的测定，测定准确度、灵敏度、精密度较差，而且操作比较繁琐，不利于在临床中广泛应用；放射免疫测定方法因为试剂有放射性污染和试剂有效期短暂(半衰期)等缺陷在逐渐被淘汰；化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析，是继放射免疫分析(RIA)和酶免疫分析(EIA)之后发展起来的一种超高灵敏度的微量测定技术，具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简单经济等优点，是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者，是目前免疫定量分析比较理想的方法。然而，目前已报道的用于检测透明质酸的化学发光试剂盒仍存在准确性较低、线性范围不够宽的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种透明质酸试剂盒及检测方法。该透明质酸检测试剂盒准确性好、灵敏度高、特异性好、线性范围宽，且检测速度快，40分钟可出结果。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供一种透明质酸检测试剂盒，一种透明质酸检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有HA衍生物的磁微粒，HA结合蛋白，酶标记的HA结合蛋白抗体；

所述HA衍生物由HA的末端羧基与偶联蛋白经EDC-NHS活化偶联而成。

一些实施方案中，所述偶联蛋白为鱼明胶、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白重的一种或多种。

一些优选实施方案中，所述偶联蛋白为鱼明胶、牛血清白蛋白、人血清白蛋白中的一种。

本发明试剂盒中，所述磁微粒的粒径为0.1-10μm。

本发明试剂盒在使用时，所述HA结合蛋白由缓冲液和保护蛋白制成HA结合蛋白溶液，所述缓冲液为0.01M-1M的PH6-PH8的磷酸盐、Tris-HCl、Hepes或Mops缓冲液，所述保护蛋白为含0.5％-10％的BSA、鱼明胶、Casein、的新生牛血清。