[发明专利]一种分离测定盐酸伐昔洛韦中杂质的高效液相色谱方法

说明书

本发明公开了一种分离测定盐酸伐昔洛韦中杂质的高效液相色谱方法，并且包含如下步骤：将盐酸伐昔洛韦溶于缓冲溶液中，形成样品溶液，采用高效液相色谱对标准品溶液和样品溶液进行检测，即可；液相色谱条件：色谱柱：C18柱；流动相A：缓冲溶液；流动相B：甲醇；采用梯度洗脱；流动相流速：0.7～1.3ml/min；柱温：30～40℃；检测波长：UV250～254nm；进样量：20μl；运行时间：75min。本发明能将盐酸伐昔洛韦及杂质完全分离，精密度高，室温操作，溶液稳定性及重现性好，可以有效分离及测定盐酸伐昔洛韦原料药中各有关物质的含量。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体而言，本发明涉及分离及测定盐酸伐昔洛韦中杂质A、B、C、D、E、H、I、J、M含量的方法。

背景技术

盐酸伐昔洛韦(Valacyclovir hydrochloride)，又名盐酸万乃洛韦，为第二代核苷类抗病毒药，是一种无环多苷酯—阿昔洛韦的前体药物。

化学结构式：

盐酸伐昔洛韦是20世纪80年代由英国Wellcome公司研制开发的，1992年3月进入一期临床试验，1995年1月在英国、爱尔兰、瑞典、法国等西欧上市，同年6月通过FDA批准，其因极高的选择性和低细胞毒性而被视为是抗病毒治疗的又一大进步。盐酸伐昔洛韦是目前世界上毒副作用小、用量较大的较为理想的新一代广谱抗病毒口服药物。目前盐酸伐昔洛韦已被收录于《中国药典》2015年版二部，由于其有关物质检测方法中流动相为15％甲醇的磷酸二氢钾缓冲溶液(用磷酸调节pH值至3.0)，流动相洗脱为等度洗脱，缺点在于①杂质A(鸟嘌呤)出峰较早，几乎与溶剂峰重叠，②杂质E(N-CBZ-L-伐昔洛韦)洗脱不出来，③杂质I(单乙酰阿昔洛韦)、杂质D(N-乙基伐昔洛韦)、杂质J(阿昔洛韦-L-异亮氨酸酯)不能很好分离；EP9.0中盐酸伐昔洛韦质量标准方法测定这几个杂质要求在15℃，苯基硅胶柱，用三氟乙酸调节pH值，缺点在于①成本较高，对于一般室温用十八碳硅胶柱用磷酸调节pH值检测来说，EP9.0中方法中色谱柱为苯基柱，调节pH值用三氟乙酸，色谱柱温度为15℃，检测成本相对较高，②杂质E(N-CBZ-L-伐昔洛韦)洗脱不出来，③分离效果不佳。

因此亟需一种能够解决这些问题、能将盐酸伐昔洛韦及杂质完全分离并且操作简单、重现性好的分离测定盐酸伐昔洛韦中杂质的高效液相色谱方法。

发明内容

基于以上现有技术的不足，本发明所解决的技术问题在于提供一种盐酸伐昔洛韦中杂质检测的高效液相色谱分析方法，该方法准确度高、精密度好、溶液稳定性好、快速高效。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种分离测定盐酸伐昔洛韦中杂质的高效液相色谱方法，使用高效液相色谱法，并且包含如下步骤：

将盐酸伐昔洛韦溶于缓冲溶液中，形成样品溶液，采用高效液相色谱对标准品溶液和样品溶液进行检测，即可；

其中，缓冲溶液是pH为2.5～3.5浓度为0.001～0.01mol/L磷酸二氢钾或磷酸二氢钠的水溶液；

液相色谱条件：

色谱柱：C18柱；流动相A：缓冲溶液；流动相B：甲醇；采用梯度洗脱；流动相流速：0.7～1.3ml/min；柱温：30～40℃；检测波长：UV250～254nm；进样量：20μl；运行时间：75min。

作为上述技术方案的优选，本发明提供的分离测定盐酸伐昔洛韦中杂质的高效液相色谱方法进一步包括下列技术特征的部分或全部：

作为上述技术方案的改进，所述用液相色谱法分离检测盐酸伐昔洛韦及其杂质过程中，需要配置如下溶液：

杂质E储备液：取5mg杂质E，于100ml容量瓶中，用60％甲醇水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；