[发明专利]一种分离测定盐酸伐昔洛韦中杂质的高效液相色谱方法

权利要求书

1.一种分离测定盐酸伐昔洛韦中杂质的高效液相色谱方法，其特征在于，使用高效液相色谱法，并且包含如下步骤：

将盐酸伐昔洛韦溶于缓冲溶液中，形成样品溶液，采用高效液相色谱对标准品溶液和样品溶液进行检测，即可；

其中，缓冲溶液是pH为2.5～3.5浓度为0.001～0.01mol/L磷酸二氢钾或磷酸二氢钠的水溶液；

液相色谱条件：

色谱柱：C18柱；流动相A：缓冲溶液；流动相B：甲醇；采用梯度洗脱；流动相流速：0.7～1.3ml/min；柱温：30～40℃；检测波长：UV250～254nm；进样量：20μl；运行时间：75min；

用液相色谱法分离检测盐酸伐昔洛韦及其杂质过程中，需要配置如下溶液：

杂质E储备液：取5mg杂质E，于100ml容量瓶中，用60％甲醇水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；

混合标准溶液：取5mg盐酸伐昔洛韦系统适用性对照品置10ml量瓶中，加入杂质E储备液0.2ml，用缓冲溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；

样品溶液：取盐酸伐昔洛韦样品25mg，于50ml容量瓶中，用缓冲溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；

空白溶液：缓冲溶液；

所述盐酸伐昔洛韦系统适用性对照品为EP对照品，含有杂质A、B、C、D、E、H、I、J、M、R，各杂质的具体名称及化学结构如下：

杂质A为鸟嘌呤，结构式为

杂质B为阿昔洛韦，结构式为

杂质C为N-甲基伐昔洛韦，结构式为

杂质D为N-乙基伐昔洛韦，结构式为

杂质E为N-CBZ-L-伐昔洛韦，结构式为

杂质H为阿昔洛韦-L-丙氨酸酯，结构式为

杂质I为单乙酰阿昔洛韦，结构式为

杂质J为阿昔洛韦-L-异亮氨酸酯，结构式为

杂质M为N-甲酰基伐昔洛韦，结构式为

杂质R为D-伐昔洛韦，结构式为

所述采用梯度洗脱具体为按照下述体积比进行线性梯度洗脱：0min：90％A+10％B→5min：90％A+10％B→55min：40％A+60％B→65min：40％A+60％B→65.1min：90％A+10％B→75min：90％A+10％B。

2.如权利要求1所述的分离测定盐酸伐昔洛韦中杂质的高效液相色谱方法，其特征在于：所述采用高效液相色谱对标准品溶液和样品溶液进行检测后的计算方法采用校正后峰面积归一化法计算，杂质A和B的校正因子为0.7，其他均为1.0。

3.如权利要求1所述的分离测定盐酸伐昔洛韦中杂质的高效液相色谱方法，其特征在于：所述C18柱为十八烷基键合硅胶柱。

4.如权利要求1所述的分离测定盐酸伐昔洛韦中杂质的高效液相色谱方法，其特征在于：所述缓冲溶液为磷酸二氢钾水溶液；所述缓冲溶液浓度为0.005mol/L。

5.如权利要求1所述的分离测定盐酸伐昔洛韦中杂质的高效液相色谱方法，其特征在于：所述缓冲溶液的pH值采用磷酸调节。