[发明专利]一种果胶酯酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种果胶酯酶的制备方法，其特征在于，包括，将采用原核微生物为受体的基因工程菌株pEASY-E1-243/BL21接种至含Amp120 μg/mL的改良LB发酵培养液中扩培发酵，随后添加IPTG诱导产果胶酯酶，获得成熟发酵液后添加蛋白酶抑制剂，超滤收集分子量在10-50kD的酶液，即得；

其中，所述改良LB发酵培养液的质量比配方为：葡萄糖0.42%- 0.58%+胰蛋白胨0.7%-1.2%+酵母提取物0.4%-0.58%+NaCl 0.8%- 1.2%，余量为水；在用于扩培发酵前，所述改良LB发酵培养液用NH₃·H₂O调pH值为7.5，并在121℃下灭菌30 min，冷却后添加无菌氨苄青霉素至终浓度为120 μg/mL；所述IPTG的添加时间为扩培发酵至OD₆₀₀为0.4-0.6，所述IPTG的添加量为控制其终浓度为1.0-1.2 mmol/L；所述蛋白酶抑制剂的添加时间为，添加IPTG后，在28℃诱导培养12-18 h，获得成熟发酵液；所述蛋白酶抑制剂为PMSF和DTT的混合物，所述PMSF和DTT的添加量为控制其终浓度分别为1.0-1.2 mmol/L。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述扩培发酵的方法为：按体积比为1: 40-50的比例将所述pEASY-E1-243/ BL21的种子液与所述改良LB发酵培养液置于密封的发酵罐中，控制灌装量为发酵罐容积的50%-60%，同时通过添加NH₃·H₂O控制pH值为7.0，35-37℃，搅拌速度为200 r/min，对应于每升种子液的通气量为0.8 m³/h。

3.权利要求1或2所述的制备方法在高酯果胶脱酯中的应用。