[发明专利]一种染色体非整倍体异常的检测方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种染色体非整倍体异常的检测方法，包括以下步骤：

1)根据待测染色体在全基因组范围内筛选重复但不完全相同的重复序列，其参数要求为同源性大于等于90％，碱基长度大于等于1kb，该重复序列可随机分布在其它非待测染色体上，即参考染色体；所述待测染色体序列与参考染色体序列位于不同染色体上；且所述待测染色体序列与参考染色体序列为同源关系，序列具有保守性；

2)将待测染色体序列与参考染色体序列进行比对，标记序列中的差异碱基位置，设计一对同源的扩增引物，无需覆盖差异碱基；设计一条特异的荧光标记探针，即Gap探针，所述Gap探针与待测染色体序列完全匹配，与参考染色体序列不完全匹配，含2-3个差异碱基；引物探针的设计区域均无SNP发生干扰；

3)使用同源引物进行PCR，在一个反应管内同时扩增待测染色体序列与参考染色体序列，得到两种PCR扩增产物；

4)基于微滴式数字PCR平台拷贝数定量检测方法，读取不同通道的荧光信号并计算拷贝数，进行RCD的数据模型分析；或基于实时荧光PCR平台熔解曲线检测方法，Gap探针随着温度改变而发生荧光强度的变化，进行熔解峰峰高Rm比值关联的Z-Score数据模型分析。

2.根据权利要求1所述的一种染色体非整倍体异常的检测方法，其特征在于：所述重复序列包括两段重复但不完全相同的序列，同源性参数同时满足大于90％，小于100％。

3.根据权利要求1所述的一种染色体非整倍体异常的检测方法，其特征在于：所述同源的扩增引物为一对扩增引物，或是多对扩增引物多片段扩增；一对同源的扩增引物与模板完全匹配，同时扩增待测染色体序列和参考染色体序列。

4.根据权利要求1所述的一种染色体非整倍体异常的检测方法，其特征在于：所述多色探针熔解曲线分析采用荧光标记探针；所述的多色探针5’端合成的荧光基团包括FAM、HEX、ROX、CY5，3’端合成的淬灭基团包括BHQ1、BHQ2。

5.根据权利要求1所述的一种染色体非整倍体异常的检测方法，其特征在于：所述数字PCR拷贝数定量分析数据处理方式包括RCD数据分析、归一化处理、Z-Score数学模型分析；所述多色探针曲线分析数据处理方式包括峰高比值处理、归一化处理、Z-Score数学模型分析。