[发明专利]乳品中痕量金黄色葡萄球菌活菌的快速定量检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种快速定量检测出乳品中金黄色葡萄球菌活菌试剂盒，含有以下标准菌株：

金黄色葡萄球菌ATCC 6538P标准菌株；

表皮葡萄球菌CICC 102942标准菌株；

检测方法是：用流式分析仪检测经荧光标记的细菌；计数不同荧光信号，获得活菌的检测浓度，再按以下公式计算被测样品中活菌的原始浓度：

log(10X)＝1.0271log Y+2.7606

式中，

Y为待测样品中金黄色葡萄球菌的原始浓度，CFU/mL(g)；

X为流式分析仪检测出的金黄色葡萄球菌增菌后的浓度，CFU/mL。

2.权利要求1所述的试剂盒，还含有以下成分：

2.7μm～15μm孔径的滤膜；

蛋白酶K，-20℃存于避光EP管；

Triton X-100，存于试剂瓶；

金黄色葡萄球菌免疫荧光抗体，存于避光EP管；

膜选择通透性荧光染料，存于避光EP管；

增菌液，成分为：蛋白胨3～30g/L，牛肉粉0.5～10g/L，氯化钠60～80g/L，；pH7.2～7.6，存于避光塑料瓶。

3.权利要求1所述的试剂盒，所述检测方法是，在进行检测之前，先对待检样品进行前处理；所述前处理是进行增菌、富集和纯化处理。

4.权利要求3所述的试剂盒，所述增菌，是将待测样品加入增菌悬液进行培养，然后过滤，收集滤液；所述富集，是将上述滤液离心，弃去上层液体，保留底部的沉淀；所述纯化，是将上述沉淀加入PBS重悬沉淀，得到纯化的样品菌悬液。

5.权利要求1所述的试剂盒，所述荧光标记，是对副溶血弧菌分别进行特异性免疫荧光抗体标记和膜选择通透性荧光染料标记，区分死菌和活菌。

6.权利要求5所述的试剂盒，所述免疫荧光抗体是荧光发射光谱在501nm～540nm的绿色荧光染料通过化学基团交联的副溶血弧菌多克隆抗体或单克隆抗体；所述膜选择通透性荧光染料是荧光发射光谱在601nm～640nm的红色荧光染料。

7.权利要求1所述的试剂盒，所述流式分析仪的技术指标是：荧光灵敏度10MESF，颗粒尺寸40nm，荧光分辨率RSD2％，样品分析速率10000events/min。

8.权利要求1所述的试剂盒，所述流式分析仪检测参数如下：分析速度为1～15μL/min，检测时间为15～300s。