[发明专利]一种诱导人间充质干细胞成脂分化培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种可诱导人间充质干细胞成脂分化的培养基及其制备方法，属于干细胞培养技术领域。该成脂诱导培养基包括以下成分：低糖DMEM基础培养基、胎牛血清、3‑异丁基‑1‑甲基黄嘌呤、抗牛胰岛素、吲哚美辛、地塞米松。本发明可高效快速特异诱导包括脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞在内的多种组织来源的人间充质干细胞定向成脂分化，诱导15天内即可成脂分化，大大缩短分化时间，提高分化效率，制备方法简单，使用方便。

技术领域

本发明涉及干细胞培养技术领域，具体涉及一种用于人间充质干细胞定向分化为脂肪细胞的诱导培养基。

背景技术

间充质干细胞是一类早期未分化的细胞，具有自我更新、自我复制以及多向分化潜能等特点。由于间充质干细胞的自我更新和多向分化潜能，使其具备了细胞再生和组织修复的能力。大量研究已开始关注间充质干细胞疗法在多种器官损伤修复和组织再生中的应用。体外利用诱导培养基诱导间充质干细胞定向成脂分化构建组织工程脂肪，在软组织缺损的修复、整形美容以及再生医学等领域有重要的意义和应用前景。因此，高效促进间充质干细胞体外定向成脂分化，以获得大量优质的脂肪细胞，是为软组织缺损的修复提供合格的自体移植脂肪的关键。

现有的人间充质干细胞成脂诱导分化培养基主要成分一般为：基础培养基、胎牛血清(FBS)、地塞米松、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛素和吲哚美辛。该成脂诱导分化培养基分化效率有限，对多种人间充质干细胞的成脂诱导分化效果差异大，诱导时间长达3周，无法满足临床应用的需要，需优化诱导条件以提高人间充质干细胞定向成脂分化，从而在短期内高效获得脂肪细胞进行临床上的组织修复，以及为人间充质干细胞成脂分化能力鉴定、临床整形美容和再生医学提供有利的条件。

发明内容

为解决现有技术中存在的成脂诱导效率不够理想、分化周期较长等问题，本发明提供一种在15天内诱导人间充质干细胞成脂分化的培养基及其诱导方法，其分化效果好，分化周期短。

一种用于诱导人间充质干细胞成软骨分化的培养基，其特征在于：由以下组分制成包含低糖DMEM(LG-DMEM)培养基、胎牛血清5-50％体积百分比、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤111-200μg/ml浓度、牛胰岛素57-100μg/ml浓度、吲哚美辛72-100μg/ml浓度、地塞米松39-100ng/ml浓度。

优选由以下组分配置：LG-DMEM培养基、胎牛血清10％体积百分比、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤111μg/ml浓度、牛胰岛素57μg/ml浓度、吲哚美辛72μg/ml浓度、地塞米松39ng/ml浓度。

优选的基础培养基中也包含有0.5-1％的青霉素和0.5-1％的链霉素。

优选的培养基配置分为A液和B液，A液成分为LG-DMEM培养基、胎牛血清10％体积百分比、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤111μg/ml浓度、牛胰岛素57μg/ml浓度、吲哚美辛72μg/ml浓度、地塞米松39ng/ml浓度；B液成分为LG-DMEM培养基，胎牛血清10％体积百分比，牛胰岛素57μg/ml浓度。

优选的所述人间充质干细胞为脐带间充质干细胞和脂肪间充质干细胞第二代至第五代，接种密度为2.25×10^5个/ml，诱导培养条件为37℃，5％CO₂，培养时间为12-15天。

一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法包括以下步骤：

1)培养瓶消毒：将培养瓶清洗干净后再次用去离子水冲洗三次，晾干后用牛皮纸包好，放入高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌30min后烘干备用；

2)DMEM培养基添加：无菌条件下添加低糖DMEM培养基到培养瓶中；

3)组分混合：依次加入所述浓度的FBS、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤母液、牛胰岛素母液、吲哚美辛母液、地塞米松母液，混合均匀；

4)过滤除菌：将混合后的培养基用0.22μm的滤膜在超净工作台过滤除菌。