[发明专利]一种诱导人间充质干细胞成脂分化培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种用于诱导间人充质干细胞成脂分化的培养基，其特征在于：由以下组分制成，包含低糖DMEM(LG-DMEM)培养基、胎牛血清5-50％体积百分比、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤111-200μg/ml浓度、牛胰岛素57-100μg/ml浓度、吲哚美辛72-100μg/ml浓度、地塞米松39-100ng/ml浓度。

2.根据权利要求1所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)培养瓶消毒：将培养瓶清洗干净后再次用去离子水冲洗三次，晾干后用牛皮纸包好，放入高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌30min后烘干备用；

2)DMEM培养基添加：无菌条件下添加低糖DMEM培养基到培养瓶中；

3)组分混合：依次加入所述浓度的FBS、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤母液、牛胰岛素母液、吲哚美辛母液、地塞米松母液，混合均匀；

4)过滤除菌：将混合后的培养基用0.22μm的滤膜在超净工作台过滤除菌。

3.根据权利要求1所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法，其特征在于，所述人间充质干细胞成脂诱导分化通过以下方法：

1)获得人间充质干细胞：利用含10％FBS的低糖DMEM培养基培养扩增人间充质干细胞；

2)预处理：使用胰酶消化细胞，用含10％FBS的低糖DMEM培养基重悬细胞；

3)细胞接种：取细胞按照2.25×10^5个/ml细胞量接种到六孔板上，用含10％FBS的低糖DMEM培养基培养细胞生长至基本融合；

4)诱导培养：每孔加入2ml所述人间充质干细胞培养基A液，培养箱中进行成脂分化诱导培养培养3天，三天后更换为B液培养，B液培养2天后再次更换为A液培养3天，再更换为B液培养至15天，每隔两天换一次新鲜培养基。

4.根据权利要求1所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法，其特征在于，所述人间充质干细胞为脐带间充质干细胞和脂肪间充质干细胞。

5.根据权利要求1所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法，其特征在于，所述人间充质干细胞为脐带间充质干细胞和脂肪间充质干细胞第二代至第五代。

6.根据权利要求1所述的一种人间充质干细胞成脂诱导分化培养基的制备方法，其特征在于，所述牛胰岛素为MedChemExpress公司生产，货号为11070-73-8。

7.根据权利要求2所述的人间充质干细胞成脂诱导分化的方法，其中所述间充质干细胞在具有5％的二氧化碳含量和37℃环境下培养所述间充质干细胞。