[发明专利]一种具有沙漠土壤保湿功能的蓝藻培养方法

权利要求书

1.一种具有沙漠土壤保湿功能的蓝藻培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

Step.1保湿藻的分离：称取沙漠土壤样品，按每100g至200g沙漠土壤样品中加入300ml至500ml的BG11液体培养基计，向沙漠土壤样品中加入BG11液体培养基，在转速为80rpm至100rpm条件下用摇床5min至10min，使样品与培养基充分混匀，将混合物在温度为27℃至30℃、光照为3000Lux至3500Lux条件下静止培养7天至21天，等培养物上清液变绿后，按每300μL至500μL上清液涂布在25ml至30ml TAP固体培养基上计，在无菌条件下吸取上清液，涂布在含有BG11固体培养基的培养皿中，并在温度为27℃至30℃、光照为3000Lux至3500Lux条件下培养7天至21天得到保湿藻培养物；

Step.1纯化：按每单个保湿藻藻丝接种在25ml至35ml的BG11固体培养基上计，用已灭过菌的接种环在保湿藻培养物种挑去单个保湿藻藻丝，划线法接种在含有BG11固体培养基的固体平板上，在温度27℃至30℃、光照为3000Lux至3500Lux条件下培养7天至21天得到一代保湿藻藻体，再用已灭过菌的接种环在一代保湿藻藻体中挑去单个保湿藻藻丝接种在含有新的BG11固体培养基的固体平板上，在温度为27℃至30℃、光照为3000Lux至3500Lux条件下培养7天至21天得到二代保湿藻藻体，重复直至接种5代至7代，最后得到纯保湿藻藻体；

Step.3规模化培养：按每个单藻丝接种到250ml至1000ml BG11液体培养基上计，在纯保湿藻藻体中挑取单个藻丝，接种到BG11液体培养基中，在温度为27℃至30℃、光照为3000Lux至3500Lux条件下进行开放式培养7天至21天制备得到藻液浓度的光密度(OD560)达到1.0的保湿藻母种子悬浮液。(1)初选：按每100L至500L BG11液体培养基中接入1％至3％体积的保湿藻母种子悬浮液计，向新的BG11液体培养基中接入保湿藻母种子悬浮液，接种浓度的光密度(OD560)以0.10为宜，用电磁式空气泵连续搅拌增碳或用二氧化碳压缩气瓶直接增碳，在温度为25℃至31℃、光照为2000Lux至4000Lux条件下进行规模化开放式培养7天至21天后当藻液浓度的光密度(OD560)达到1.0时，用300目绢布精选粗壮悬浮性好的藻丝进行复选。(2)复选：当初选出的藻丝按上述再接种在新鲜BG11液体培养基中，在温度为25℃至31℃、光照为2000Lux至4000Lux条件下进行规模化开放式培养7天至21天，藻液浓度的光密度值(OD560)达到1.0后，用200目绢布筛进行复选，以上步骤重复3次至5次。(3)扩种：当日平均温度达到20℃以上时，把复选后的藻种接种到含有1000L至5000L BG11液体培养基的一级培养池，在接种后浓度的光密度(OD560)为0.10，温度为25℃至31℃、光照为2000Lux至4000Lux条件下进行开放式培养7天至21天。藻液浓度的光密度值(OD560)达到1.0以上时接种到含有5000L至50000L BG11液体培养基的二级培养池，逐级扩大到含有50000L至200 000L BG11液体培养基的三级培养池，在温度为25℃至31℃、光照为2000Lux至4000Lux条件下进行开放式培养7天至21天。

2.根据权利要求1所述的一种具有沙漠土壤保湿功能的蓝藻培养方法，其特征在于：所述BG11液体培养基包括1.5g NaNO₃，0.04g K₂HPO₃.3H₂O，0.075g MgSO₄.7H₂O，0.036gCaCl₂.2H₂O，0.006g柠檬酸，0.006g柠檬酸铁铵，0.001g EDTA.Na₂，0.02g Na₂CO₃，1ml微量元素溶于水配制成1L的溶液得到BG11液体培养基，该BG11液体培养基的pH范围为7.0至7.2。

3.一种蓝藻培养的BG11固体培养基的制备方法，其特征在于：将1.5g NaNO₃，0.04gK₂HPO₃.3H₂O，0.075g MgSO₄.7H₂O，0.036g CaCl₂.2H₂O，0.006g柠檬酸，0.006g柠檬酸铁铵，0.001g EDTA.Na₂，0.02g Na₂CO₃，1ml微量元素溶于水配制成1L的溶液向该溶液中加入溶液总体积1.8％至2％的琼脂粉，并将该溶液的PH范围调节到7.0至7.2，将该溶液在121℃、0.11MPa、20min高压湿热灭菌后，在40℃下冷却并凝固，使其成为固体状态即得到BG11固体培养基。