[发明专利]一种复苏植物垫状卷柏的组培繁殖方法

权利要求书

1.一种复苏植物垫状卷柏的组培繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)无菌外植体的获得

选取野生垫状卷柏植株的幼嫩枝条尖端作为外植体，经过消毒灭菌后，获得无菌外植体；所述幼嫩枝条为垫状卷柏植株中心生长点向外数第2～3层的枝条；所述消毒灭菌方式具体是用1％v/v的洗洁精水对外植体进行表面清洁，然后放置于烧杯中，烧杯上覆盖纱布，用流动水冲洗2～2.5小时；再在无菌条件下，将外植体用消毒剂消毒灭菌12～15分钟，随后用无菌水冲洗5～6次，每次冲洗2～3分钟；所述的消毒剂是浓度为0.1％w/v的HgCl₂溶液；

(2)原生芽的诱导

将步骤(1)中获得的无菌外植体接种在原生芽诱导培养基上，放置于20～25℃培养室中进行暗培养，暗培养周期为30～45天，所述原生芽诱导培养基为：1/2MS+6-BA 0.1～0.2mg/L+NAA 0.1～0.2mg/L+柠檬酸400～500mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80；

(3)不定芽的增殖

将步骤(2)中获得的原生芽接种在不定芽增殖培养基上，放置于培养室中进行增殖培养，增殖培养的周期为50～60天，所述不定芽增殖培养基为：1/2MS+6-BA 0.8～1.0mg/L+NAA 0.05～0.1mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80；所述增殖培养环境条件为：20～25℃,光照强度为30～40μmol·m^-2·s^-1，每天光照时间为16小时；

(4)组培苗壮苗和生根培养

待步骤(3)中不定芽的高度达到5～7mm时，将单个的不定芽切割下来，接种于组培苗壮苗和生根培养基上，放置于与步骤(3)相同的培养环境条件下培养，组培苗壮苗和生根培养周期为70～80天，所述组培苗壮苗和生根培养基为：1/4～1/2MS+活性炭1～2g/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80。