[发明专利]一种辣椒遗传转化体系的制备方法

说明书

本发明属于植物组织遗传领域，特别涉及一种辣椒遗传转化体系的制备方法。该方法包括：预培养、侵染、共培养、芽分化、芽伸长、生根、验证步骤，通过根癌农杆菌向辣椒中转入pCAMBIA1302双元质粒载体。本发明的制备方法不仅包括得到转基因植株的步骤，还包括对转基因植株的验证步骤，形成了完整的转基因体系，可实现转基因辣椒的快速培育，为辣椒基因功能组学的研究和育种奠定基础，从而培育出丰产、优质的辣椒新品种。

技术领域

本发明属于植物组织遗传领域，特别涉及一种辣椒遗传转化体系的制备方法。

背景技术

转基因技术是利用重组DNA、细胞组织培养或种质系统转化等技术，将外源基因导入植物细胞或组织，使之定向重组遗传物质，改良植物性状，培育优质高产作物新品种的技术。转基因技术已成为植物分子生物学研究的强有力的实验手段，更是基因克隆、功能基因组研究必不可少的实验工具。这种技术和常规育种方法比较，所具特点有:1)不受亲缘关系的限制，可实现动植物和微生物间遗传物质的交流；2)有效地打破有利基因和不利基因的连锁，充分利用有用基因；3)加快育种进程，缩短育种年限。遗传转化方法为三类：1)农杆菌介导的基因转移；2)以原生质体、细胞或组织为受体的直接转移，如电激、微注射、PEG介导法；3)种质系统的基因转移，如利用子房注射、种胚、体细胞胚及花粉。目前应用最多的是根癌农杆菌介导的转基因方法，迄今所获得的200多种转基因植物中，80％以上是利用该方法获得的。

辣椒为茄科辣椒属蔬菜作物在世界各地广泛种植，是一种非常重要的经济和营养蔬菜作物，在世界各地广泛种植。与其他作物一样，辣椒生产过程中常受到害虫，疾病和非生物胁迫的威胁。辣椒对非生物胁迫耐受性的基因工程对于提高农业生产力至关重要，这取决于高效可靠的遗传转化体系。

辣椒转基因植物长期以来都没有建立起来成熟稳定的辣椒转基因体系。辣椒的再生具有高度基因型依赖性，并且农杆菌介导的转化效率在该系统中受到限制，再生效率不理想，在多数试验中植株的再生周期长或分化频率低，其不定芽的生长能力较差，有的甚至停留在芽诱导阶段而不能进一步生长，这在很大程度上限制了辣椒基因工程的研究进展。自从首次开展辣椒组织培养工作以来，国内外相继出现采用不同的辣椒外植体，如子叶、茎尖、茎段、叶片、下胚轴、子叶柄、花药及其原生质体等进行组织培养的报道。目前，关于辣椒转基因工作研究主要集中遗传转化体系的建立上，但遗传转化过程仍存在一些主要问题限制了辣椒转基因技术在实际育种中的应用，如：培养周期长、植株再生困难和遗传转化率低等。

因此，如何建立针对于辣椒的成熟的遗传转化体系、提高遗传转化率是辣椒转基因工作中急需解决的一个难题。

发明内容

本发明提供一种辣椒遗传转化体系的制备方法。

本发明是通过以下的技术方案实现的。

一种辣椒遗传转化体系的制备方法，包括：

预培养步骤：将辣椒外植体置于预培养基进行预培养，得到预培养外植体；侵染步骤：将所述预培养外植体于农杆菌侵染液中进行侵染，得到侵染后的外植体；共培养步骤：将所述侵染后的外植体移入共培养基进行共培养，得到共培养外植体；芽分化步骤：将所述共培养外植体移入选择性培养基进行选择性培养，再转入芽分化培养基进行芽分化培养，得到不定芽；芽伸长培养步骤：将所述不定芽移入芽伸长培养基进行芽伸长培养，得到伸长芽；生根培养步骤：将所述伸长芽移入生根培养基进行生根培养，得到转基因再生植株；优选地，所述农杆菌为根癌农杆菌，更优选为LBA4404菌株；转入所述农杆菌的质粒载体为双元质粒载体，更优选为pCAMBIA1302质粒载体。

在优选的实施方式中，所述外植体为辣椒子叶。