[发明专利]一种辣椒遗传转化体系的制备方法

权利要求书

1.一种辣椒遗传转化体系的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括：

预培养步骤：将辣椒外植体置于预培养基进行预培养，得到预培养外植体；

所述预培养基包括：在MS基本培养基的基础上，添加：吲哚乙酸至终浓度2-8mg/L，蔗糖至终浓度20-40 g/L，琼脂粉至终浓度5-10 g /L；

所述预培养步骤中，所述预培养的时间为3-4天；所述预培养的光照条件为弱光，在1800-2300LUX下，用薄纸覆盖培养器；所述预培养的温度为24-28℃；

侵染步骤：将所述预培养外植体于农杆菌侵染液中进行侵染，得到侵染后的外植体；

共培养步骤：将所述侵染后的外植体移入共培养基进行共培养，得到共培养外植体；

所述共培养基包括：在MS基本培养基的基础上，添加：6-苄氨基嘌呤至终浓度2-8mg/L，吲哚乙酸至终浓度2-8mg/L，蔗糖至终浓度20-40 g/L，琼脂粉至终浓度5-10 g /L；

所述共培养步骤中，所述共培养的时间为1-3天，温度为25℃，光照条件为黑暗；

芽分化步骤：将所述共培养外植体移入芽分化培养基进行芽分化培养，得到不定芽；

所述芽分化培养基包括：在MS基本培养基的基础上，添加：6-苄氨基嘌呤至终浓度2-8mg/L，吲哚乙酸至终浓度2-8mg/L，潮霉素至终浓度10-30 mg/L，头孢氨苄至终浓度0.1-0.3 mg/L，蔗糖至终浓度20-40 g/L，琼脂粉至终浓度5-10 g /L，2-异戊烯腺嘌呤至终浓度1.0-3.0mg/L，吲哚丁酸至终浓度1-3mg/L和酵母提取物，所述酵母提取物与MS基本培养基的质量百分比为0.1-0.4%；

所述芽分化步骤中，所述芽分化培养的时间为2-4周，温度为26-28℃，光照条件为每天16h光照8h黑暗，其间每5-7天更换一次培养基；

芽伸长培养步骤：将所述不定芽移入芽伸长培养基进行芽伸长培养，得到伸长芽；

所述芽伸长培养基包括：在MS基本培养基的基础上，添加：吲哚乙酸至终浓度2-8mg/L，潮霉素至终浓度20-40 mg/L，赤霉素至终浓度0.5-1.5mg/L，蔗糖至终浓度20-40 g/L，琼脂粉至终浓度5-10 g /L；

所述芽伸长培养步骤中，所述芽伸长培养的光照条件为1800-2300LUX，温度为24-28℃；

生根培养步骤：将所述伸长芽移入生根培养基进行生根培养，得到转基因再生植株；

所述生根培养基包括：在MS基本培养基的基础上，添加：吲哚乙酸至终浓度2-8mg/L，头孢氨苄至终浓度100-600mg/L，蔗糖至终浓度20-40 g/L，琼脂粉至终浓度5-10 g /L；

所述生根培养步骤中，所述生根培养的光照条件为1800-2300LUX，温度为24-28℃；

所述辣椒品种选自国福403。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于：所述农杆菌为根癌农杆菌；转入所述农杆菌的质粒载体为双元质粒载体。

3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于：所述农杆菌为LBA4404 菌株；转入所述农杆菌的质粒载体为pCAMBIA1302质粒载体。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于：所述外植体为辣椒子叶。

5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于：所述预培养步骤中，所述预培养的时间为4天；光照条件为弱光，在2000LUX下，用薄纸覆盖培养器；温度为25℃。

6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于：所述预培养基包括：在MS基本培养基的基础上，添加：吲哚乙酸至终浓度5 mg/L，蔗糖至终浓度30 g/L，琼脂粉至终浓度8 g /L。

7.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于：所述侵染步骤中，所述农杆菌侵染液的制备方法包括：将含有质粒载体的单菌落接种于LB液体培养基，再培养至OD₆₀₀值为0.4-0.6，之后进行离心处理保留沉淀物，再向所述沉淀物中加入1/2MS液体培养基并混匀，得到所述农杆菌侵染液。