[发明专利]一种椰枣的组织培养中快速繁殖的方法

说明书

本发明提供一种椰枣的组织培养中快速繁殖的方法,包括:(1)配制相应培养基，备用(2)取生长高度18～22cm,树龄10～14个月的椰枣幼苗的幼嫩茎段部分作为外植体(3)放在抗褐化剂中遮光浸泡,再用海藻酸钠溶液浸泡(4)依次在酒精、山梨酸钾水溶液、次氯酸钠溶液、升汞溶液中浸泡(5)将外植体切成0.8～1.2cm小段于培养基中(6)在黑暗条件下诱导培养；待嫩芽长至2.5～3.5cm,转至光照培养，并进行增殖培养、生根培养，直至获得9～12cm幼苗(7)幼苗移栽(8)水分、施肥及防病管理。本发明实现了将椰枣幼苗茎段作为外植体的组培快速繁殖,不定芽诱导率高,污染率和褐化率低,生长周期短,移栽成活率高。

技术领域

本发明涉及棕榈植物繁殖技术领域，特别涉及一种椰枣的组织培养中快速繁殖的方法。

背景技术

目前国际上关于椰枣组培做的比较成熟的是阿联酋、埃及等国家。阿拉伯国家主栽椰枣树，其国内有丰富的椰枣资源，由于椰枣大树更容易取出茎尖，使用的外植体通常来自3～5年生椰枣大树，将椰枣树砍伐，取整棵树的茎尖，诱导从生芽，但棕榈科植株生长周期漫长，至诱导丛生芽整个过程需要至少12个月的时间，而且取材成本高，生长周期漫长。而对于椰枣幼苗茎尖生长点较小，不易取出，且在组织培养的过程中极其容易褐化和死亡，故在现有技术中难以有效利用椰枣幼苗作为外植体。

我国处于引种椰枣树阶段，椰枣资源匮乏，多年生的优良椰枣大树资源更是紧缺。传统育苗生长周期漫长，繁殖系数低，因此，研究采用椰枣幼苗的茎段作为外植体，通过组织培养技术在短期内快速建立椰枣植株再生体系的方法，以实现不定芽的快速诱导，缩短育苗生长周期，为种苗的供应提供技术支撑具有重要意义。

发明内容

鉴于此，本发明提出一种椰枣的组织培养中快速繁殖的方法，实现了将椰枣幼苗茎段作为外植体的组培快速繁殖，不定芽诱导率和增殖系数提高，且外植体处理污染率和褐化率低，成苗的生长速度快，生长周期短，移栽成活率高。

本发明的技术方案是这样实现的：

本发明提供一种椰枣的组织培养中快速繁殖的方法，包括如下步骤：

(1)配制培养基

改良MS基本培养：在MS基本培养基中加入谷氨酸195～205mg/L、肌醇98～102mg/L、磷酸二氢钾0.16～0.18mg/L、腺嘌呤38～42mg/L、维生素B1 0.2～0.4mg/L、烟酸0.2～0.4mg/L；

诱导培养基：以MS为基本培养基，并添加0.05～0.15mg/L 2,4-D、0.5～1.5mg/LNOA、0.05～0.15mg/L 2-IP、0.2～0.8mg/L KT、0.5～1.5mg/L 6-BA、33～38g/L蔗糖、6.0～7.0g/L琼脂，pH 5.5～5.9；

增殖培养基：在改良MS培养基中添加0.1～0.3mg/L 2,4-D、0.5～1.5mg/L NAA、0.05～0.15mg/L 2-ip、0.5～1.5mg/L 6-BA、蔗糖32～38g/L；

生根培养基：在改良MS培养中添加0.5～1.5mg/L NAA、0.3～0.8mg/L GA3、0.5～1.5mg/L 6-BA、蔗糖28～32/L；

将上述培养基在120～122℃，0.13～0.16MPa高温高压下灭菌18～22分钟，放置凝固后备用；

(2)选取外植体

取生长高度为18～22cm，树龄为10～14个月的椰枣幼苗，将幼苗的外部叶片剥离，取出裸露出幼嫩的茎段部分作为外植体；

(3)外植体防褐化处理

将外植体在抗褐化剂中遮光浸泡2.5～3.5小时后，采用0.1～0.3％的海藻酸钠溶液中浸泡5～10min；所述抗褐化剂包括145～155mg/L的抗坏血酸和95～105mg/L柠檬酸；