[发明专利]一种椰枣的组织培养中快速繁殖的方法

权利要求书

1.一种椰枣的组织培养中快速繁殖的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）配制培养基

改良MS基本培养基：在MS基本培养基中加入谷氨酸195~205mg/L、肌醇98~102mg/L、磷酸二氢钾0.16~0.18mg/L、腺嘌呤38~42mg/L、维生素B1 0.2~0.4mg/L、烟酸0.2~0.4mg/L；

诱导培养基：以MS为基本培养基，并添加0.05~0.15mg/L 2,4-D、0.5~1.5mg/L NOA、0.05~0.15mg/L 2-IP、0.2~0.8mg/L KT、0.5~1.5mg/L 6-BA、33~38g/L蔗糖、6.0~7.0g/L琼脂，pH 5.5~5.9；

增殖培养基：在改良MS培养基中添加0.1~0.3mg/L 2,4-D、0.5~1.5mg/L NAA、0.05~0.15mg/L 2-ip、0.5~1.5mg/L 6-BA、蔗糖32~38g/L；

生根培养基：在改良MS培养中添加0.5~1.5mg/L NAA、0.3~0.8mg/L GA3、0.5~1.5mg/L6-BA、蔗糖28~32g/L；

将上述培养基在120~122℃，0.13~0.16MPa高温高压下灭菌18~22分钟，放置凝固后备用；

（2）选取外植体

取生长高度为18~22cm，树龄为10~14个月的椰枣幼苗，将幼苗的外部叶片剥离，取裸露出幼嫩的茎段部分作为外植体；

（3）外植体防褐化处理

将外植体在抗褐化剂中遮光浸泡3小时后，采用0.1~0.3%的海藻酸钠溶液中浸泡5~10min；所述抗褐化剂为150mg/L的抗坏血酸和100mg/L柠檬酸；

（4）外植体灭菌处理

将浸泡后的外植体进行消毒灭菌处理，消毒灭菌程序为：先将外植体于73~78%的酒精中浸泡25~35秒，用无菌水冲洗；采用浓度为0.01~0.02g/L山梨酸钾水溶液中浸泡1~2分钟，用无菌水冲洗；采用浓度为0.02~0.03%次氯酸钠溶液浸泡1~2分钟，用无菌水冲洗；再在浓度0.05~0.15%的升汞溶液中浸泡6~10分钟，用无菌水冲洗；

（5）接种

将消毒灭菌后的外植体用无菌滤纸吸干水分后，切成若干0.8~1.2cm小段，并根据植物形态学竖立放置于诱导培养基中，让外植体的基部充分接触培养基；

（6）培养

将接种后的培养基在温度25~30℃的黑暗条件下诱导培养18~22天；待嫩芽长至2.5~3.5cm，转至26~28℃，12h/d的光照下培养，光照强度1500lux～2000lux；

培养18~20天后，接种至增殖培养中进行继代增殖培养，在12h/d的光照下培养，光照强度为1800lux～2000lux；

培养10~15天后，接种至生根培养基中进行诱导生根，在16h/d的光照下培养，光照强度为2000lux~2500lux，直至获得9~12cm高的幼苗；

（7）移栽

将幼苗连瓶先放于控温大棚中20~23℃炼苗一周，再转移至常温下炼苗2~3天，再打开盖子炼苗1~2天，洗净根部后移栽至灭菌后的移栽基质中；

移栽基质为：泥炭土、椰糠、珍珠岩和蛭石按体积比为（1~2）:（3~5）:（3~5）:1混合而成，浇透水并覆盖薄膜保湿；移栽前，先对基质浅翻，耙平后用细木棍打孔，孔深为1~2cm，将幼苗根部放到孔中，并把周围的基质填充，稍压实，喷雾淋定根水；

（8）水分、施肥及防病管理

移栽一周前，基质湿度保持80%~85%，遮阴度为60%~70%；移栽一周后，基质湿度逐渐降低至75%，遮阴度逐渐减少至50%；空气湿度始终保持65~70%；移栽15~20天后，采用0.2%~0.3%尿素溶液喷雾，并用清水淋洗，每7~10d施肥1次；利用500倍多菌灵、500倍百菌清、800倍甲霜灵复合防病，每7~10天喷施一次。