[发明专利]双功能融合多肽、细胞和药物组合物及应用

权利要求书

1.双功能融合多肽用于提高体外CD4T细胞和CD8T细胞亚群中IFN-γ阳性细胞的比例或TNF-α阳性细胞的比例的用途，其特征在于，所述双功能融合多肽由第一功能肽、第二功能肽和所述第一功能肽与所述第二功能肽之间共价连接的连接子组成，所述连接子由依次连接的第一弹性区、回转区和第二弹性区组成，且所述第一弹性区与所述第二弹性区分别含有可形成巯基的基团，所述第一弹性区和所述第二弹性区各自的序列如SEQ ID No. 5所示，所述回转区的序列如SEQ ID No.6所示，所述第一功能肽为NKG2A的胞外区序列，其序列如SEQ ID No.1所示，且在其N端具有MGHTRRQGTSPSKCPYLNFFQLLVLAGLSHFCSG所示的序列，所述第二功能肽为CD94的胞外区序列，其序列如SEQ ID No.3所示。

2.一种用于增强DC细胞体外致敏T细胞的能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用编码GPC3抗原的mRNA和编码双功能融合多肽的mRNA转染DC细胞得到负载有mRNA的DC细胞的步骤，具体地，转染当天，用非酶类的细胞消化试剂把DC细胞消化成细胞悬液，离心后以PBS洗细胞两次，以PBS重悬细胞，调整细胞密度在25-30×10⁶DCs/ml，按照每10⁶DC细胞转染10μgmRNA的比例，混合DC细胞和融合多肽的mRNA，将细胞-mRNA混合物加入电转杯，使用电转仪，将抗原mRNA转染到DC细胞中，电转后的细胞，用无细胞因子的1640培养基重悬，调整细胞密度到2×10⁵DCs/ml，放入37℃，5％CO₂细胞培养箱中继续培养6小时；其中：

所述双功能融合多肽由第一功能肽、第二功能肽和所述第一功能肽与所述第二功能肽之间共价连接的连接子组成，所述连接子由依次连接的第一弹性区、回转区和第二弹性区组成，且所述第一弹性区与所述第二弹性区分别含有可形成巯基的基团，所述第一弹性区和所述第二弹性区各自的序列如SEQ ID No. 5所示，所述回转区的序列如SEQ ID No.6所示，所述第一功能肽为NKG2A的胞外区序列，其序列如SEQ ID No.1所示，且在其N端具有MGHTRRQGTSPSKCPYLNFFQLLVLAGLSHFCSG所示的序列，所述第二功能肽为CD94的胞外区序列，其序列如SEQ ID No.3所示；

(2)将复苏过夜的外周血单核细胞PBMC以2×10⁶/ml的浓度接种到96孔板中，每个孔接种100μl细胞，进行T淋巴细胞的激活，向孔中加入负载有mRNA的DC细胞至PBMC:DC=10:1，将细胞于37℃培养10-12天。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，编码双功能融合多肽的mRNA对应的基因序列如SEQ ID No.9所示。