[发明专利]一种改善葡萄连作障碍的个性化微生态菌肥的制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种改善葡萄连作障碍的个性化微生态菌肥的制备方法和应用，属于微生态肥料个性化定制的领域。本发明利用枯草芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、光合菌等发酵菌液，有机肥、有机料、无机料、腐熟菌剂等经过科学配方而组成。通过对土壤样品的原有微生物菌群进行生物信息分析，优化和制定具有针对性的活性复合微生态菌肥配方，利用该菌剂配方对天然植物类进行发酵，在个性化配方下，构建的活性复合微生态菌肥。其作用是通过这些个性化菌液改善作物根系生态，优化作物营养吸收环境，从而使得连作作物正常生长并达到增产增收的效果。本发明不仅具有改良土壤、预防土传病害、分解土壤有毒物质、促进植株生长和提高植株抗逆能力的功效，还解决了传统单一的生产工艺，使资源进一步得到优化和良性循环，在现代农业领域中得到充分地精准应用，填补产业空白，是一种可以有效地解决葡萄连作障碍的微生态菌肥。

技术领域

本发明属于微生态有机肥料个性化定制的技术领域，更具体地说，涉及一种微生物肥料动态配方的制定方法。

背景技术

葡萄栽培历史悠久，分布面积大，全世界都有大面积的栽培，我国近几年葡萄栽培面积、产量增长速度明显高于其它果树，产业布局向优势区转移，设施栽培在非适宜区发展较快。但随着连作年限的增加，葡萄植株出现长势衰弱、病害蔓延，严重制约着葡萄产业的发展。因此，连作障碍已成为一个广泛存在、危害严重的生产性问题。引起连作障碍的主要原因之一就是根际土壤微生物种群数量和结构发生变化，葡萄连作后根际土壤细菌、放线菌的数量明显降低，真菌数量明显增加。但目前，解决连作障碍主要集中在种植方式的更改，如轮作或间作，并未从根本上解决问题。

利用微生物组学分析和传统分离分析相结合指导开发一种改善葡萄连作障碍的个性化微生态菌肥的制备方法和应用，并把之前分析的结果和作物生长状况相结合对定制的个性化微生态菌肥的效果作出评估，从而改善解决葡萄连作障碍问题。本专利不仅具有改良土壤、预防土传病害、分解土壤有毒物质、促进植株生长和提高植株抗逆能力的功效，还解决了传统单一的生产工艺，使资源进一步得到优化和良性循环，在现代农业领域中得到充分地精准应用，填补产业空白，是一种可以有效地解决葡萄连作障碍的微生态菌肥。

发明内容

1.要解决的问题

本专利的目的在于研发一种改善葡萄连作障碍的个性化微生态菌肥的制备方法和应用，很大程度上改善葡萄连作障碍情况，使葡萄种植土壤得到自我修复，减少化肥施用量，确保葡萄品质，改良土壤状况。

2.技术方案

为了解决上述问题，本发明一种改善葡萄连作障碍的个性化微生态菌肥的制备方法和应用，包括以下步骤所采用的技术方案如下：

葡萄栽培土壤样本采集及处理：

对目标区域进行测量，采用五点采样法进行采样，取样土层25-35厘米。样本经粗处理后，采取微珠打碎或者是超声的方法提取样本中的微生物DNA，采用荧光定量法测定DNA浓度。处理后纯化后，采用515F/806RPCR(515F-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA，806R-GGACTACHVGGGTWTCTAAT)引物对微生物DNA的16SrRNA基因的V3-V4高变区进行扩增。具体步骤详见本公司专利微生物肥料动态菌剂配方的配制方法和精准应用(专利号：2018103380602)，个性化微生态菌肥料制备方法流程图如图一所示；

测定土壤中微生物总量及微生物菌群比例：使用MP Biomedicals FastDNA土壤样品提取试剂盒，提取目标土壤中微生物的总DNA，然后以16SrRNA作为目标序列，使用515F/806R PCR引物进行绝对定量，以大肠杆菌作为标准品；通过高通量基因测序技术对扩增的产物进行测序(测序长度可以到达双端500-600碱基，可以完全包括16S基因片段；可以同时对超过20000个样本的PCR扩增产物进行测定)，对测序结果进行分析评估，确定土壤样本中不同活性微生物菌群的相对含量和比例。