[发明专利]一种对叶百部指纹图谱的构建方法及鉴定方法

说明书

本发明涉及医药领域，具体公开了一种对叶百部指纹图谱的构建方法。所述对叶百部指纹图谱的构建方法包括：利用30％甲醇制备参照物溶液和供试品溶液，色谱条件采用Halo^R 5 C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm)，流动相为以乙腈‑0.4％磷酸溶液为3～40：97～60的混合溶液；流速为0.5～1.5mL/min；检测波长为254～325nm；柱温30～40℃，理论板数按绿原酸峰计算应不低于50000；分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5～20μL，注入液相色谱仪，记录4～30min的色谱峰，得到对叶百部指纹图谱。利用本发明提供的指纹图谱及其构建方法，可避免以次充好、减量投料、改变炮制、生产工艺等不严谨状况，从而截断生产出劣质药品的可能。

技术领域

本发明涉及医药领域，具体地说，涉及一种对叶百部指纹图谱的构建方法及鉴定方法。

背景技术

中国药典(2015版)一部中百部项下收载直立百部、对叶百部和蔓生百部，三种均可以按百部入药。药典中仅在性状和鉴别项下，对三种百部药用部位外观上的细微差别和纤维特征做了描述，在实际使用中对使用人员的专业程度要求极高。某些产品如需精确使用某一种百部时，难以准确判断。

因此，亟待研发一种特异性鉴定对叶百部的方法，并构建一种清晰、无干扰的、可对对叶百部中多种重要活性成分及比例进行鉴定指纹图谱，作为对该产品进行品质监控和评价的客观依据与基础。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种对叶百部指纹图谱的构建方法及鉴定方法。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

第一方面，本发明提供了一种对叶百部指纹图谱的构建方法，包括下述步骤：

(1)参照物溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，加30％甲醇制成每1mL含绿原酸0.025mg的溶液，即得；

(2)供试品溶液的制备：取对叶百部样品，加水煎煮，保持微沸，同时浓缩体积至20～30mL，冷却至室温，滤过，用水饱和正丁醇振摇提取多次，合并提取液，蒸干，加30％甲醇适量使溶解，定量转移至5mL量瓶中，加30％甲醇定容，摇匀，即得；

(3)色谱条件：采用Halo ^R 5C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm)，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流动相为以乙腈-0.4％磷酸溶液为3～40：97～60的混合溶液；流速为0.5～1.5mL/min；检测波长为254～325nm；柱温30～40℃，理论板数按绿原酸峰计算应不低于50000；

(4)测定：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5～20μL，注入液相色谱仪，记录4～30min的色谱峰，得到对叶百部指纹图谱。

作为优选，所述构建方法包括下述步骤：

(1)参照物溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，加30％甲醇制成每1mL含绿原酸0.025mg的溶液，即得；

(2)供试品溶液的制备：取1g对叶百部样品，加水煎煮，保持微沸，同时浓缩体积约20～30mL，冷却至室温，滤过，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20mL，合并提取液，蒸干，加30％甲醇适量使溶解，定量转移至5mL量瓶中，加30％甲醇定容，摇匀，即得；

(3)色谱条件：采用Halo ^R 5C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm)，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流动相为以乙腈-0.4％磷酸溶液为3～40：97～60的混合溶液；流速1mL/min；检测波长为254～325nm；柱温35℃，理论板数按绿原酸峰计算应不低于50000；