[发明专利]一种利用鱿鱼眼制备小分子透明质酸的方法

说明书

本发明公开了一种利用鱿鱼眼制备小分子透明质酸的方法，其解决现有透明质酸制备工艺繁琐、成本较高、产品纯度低的问题。包括以下步骤：1）原料预处理；2）透明质酸提取；3）除杂；4）透明质酸小分子化；5）透析、干燥。本发明利用丙酮处理鱿鱼眼使其变性，通过浮选技术提取透明质酸，再经超临界二氧化碳流体和酶解脱除脂肪和蛋白等杂质，再使用透明质酸酶对透明质酸进行剪切，最后通过透析制备小分子量介于1000‑40000Da的透明质酸。本发明操作工艺简单，成本低，安全性高，且产品纯度高，分子结构稳定，产品的生物活性高，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及透明质酸的制备，尤其是一种利用鱿鱼眼制备小分子透明质酸的方法。

背景技术

透明质酸(HA)又名玻尿酸，是一种不含硫的天然大型多糖类，由双糖单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的一种阴离子酸性粘多糖。因其超强的持水性、黏弹性和渗透性以及生物学功能，被广泛应用于保健品、化妆品和医药领域。

近年来，随着透明质酸研究的深入，小分子透明质酸因其良好的生物渗透、吸收的特性， 小分子透明质酸制备研究成为国内外研究热点。目前，小分子透明质酸制备的方法主要有物理、化学、生物降解法。然而，物理方法制备的产物分子量难以按照需要生产；化学降解方法需要较剧烈的反应条件（如强酸、碱等），才能达到高的降解程度，导致功能键断裂，有效结构被破坏，显著影响小分子透明质酸的质量和生物活性。酶解法是反应温和，是降解透明质酸的有效方法，但现有酶解方法均针对成品透明质酸进行降解，工艺较为繁琐，制备成本较高，并且现有技术仍无好的方法制备不同特定分子量的透明质酸。

鱿鱼是我国重要的水产加工原料，产生30%的加工副产物，缺乏有效的利用途径，通常用于加工鱼粉的原料。加工下脚料中鱿鱼眼约占5％，鱿鱼眼含玻璃体，可以用作小分子HA提取的资源。

发明内容

为了克服现有透明质酸制备工艺繁琐、成本较高、产品纯度低的不足，本发明的目的在于提供一种利用鱿鱼眼制备小分子透明质酸的方法。该制备方法利用丙酮使鱿鱼眼变性，再通过浮选技术提取透明质酸，经超临界二氧化碳流体和酶解脱除脂肪和蛋白等杂质，使用透明质酸酶对透明质酸进行剪切，最后通过透析制备小分子量的透明质酸，制得的小分子透明质酸分子量介于1000－40000Da。本发明方法的操作工艺简单，制备成本低，安全性高，产品纯度高，分子结构稳定，生物活性高。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种利用鱿鱼眼制备小分子透明质酸的方法，其特征在于：其经过以下步骤：

（1）原料预处理：将新鲜鱿鱼眼粉碎，加入其2-5倍重量的丙酮，静置10-15min，离心除去丙酮，得到鱿鱼眼原料；

（2）透明质酸提取：称取步骤（1）中得到的鱿鱼眼原料，加入其5-10倍重量、质量分数为1-15%的月桂醇聚醚硫酸酯铵水溶液，不断搅拌，收集产生的气泡，在收集的气泡中加入气泡重量2-5倍的、质量浓度95%的乙醇，同时用酸溶液调节pH值为5-6，充分搅拌，离心收集沉淀，并用丙酮反复冲洗，得粗透明质酸；

（3）除杂：将步骤（2）中得到的粗透明质酸用超临界二氧化碳处理；选取处理后剩余物料，加入等质量的蒸馏水，同时加入蒸馏水重量2-6%的蛋白酶，酶解并在结束后灭活，离心，取上清液；

（4）透明质酸小分子化：将步骤（3）中得到的上清液中加入质量分数为3-5%的透明质酸酶，搅拌，酶解条件为：pH值6-8，酶解温度30-40℃，酶解时间30-90min，酶解结束后离心，取上清液；

（5）透析、干燥：将步骤（4）中得到的上清液转移至透析袋中，经过两步透析，在室温下共透析20-24h，取第二步透析的去离子水，加入其1-3倍体积的、质量浓度95%的乙醇，静置，离心，取沉淀，冷冻干燥，即得透明质酸。