[发明专利]一种基于均相化学发光免疫竞争法检测犬C-反应蛋白的试剂盒

权利要求书

1.一种基于均相化学发光免疫竞争法检测犬C-反应蛋白的试剂盒，其中，所述试剂盒包括DNA1-cCRP抗原偶联物、DNA2-cCRP抗体偶联物、标记吖啶酯（AE）的DNA3和氧化石墨烯（GO）结合抗氧化剂（AOD）；

所述DNA1的序列（5’-3’）如下：ACＧＣＴＧＡＧＴＴＡＴＣＡＡCＧＡＣＴＴＴＴＴＴＴＡＴＣＡＣＡＴＣＡＧＧＣＴＣＴＡＧＣＧＴＡＴＧＣＴＡＴＴＧ-NH2C7；

所述DNA2序列（5’-3’）如下：NH2C6-ＴＡＣＧＴＣＣＡＧＡＡＣＴＴＴＡＣＣＡＡＡＣＣＡＣＡＣＣＣＴＴＴＴＴＴＴＧＴＣGＴＴＧＧＣＴＧＡＧＡＴTC；

所述DNA3序列（5’-3’）如下：AE-NH2C6-CGＡＴＣＴＣＡＧＣＡＡＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧ。

2.根据权利要求1所述的基于均相化学发光免疫竞争法检测犬C-反应蛋白的试剂盒，其中，所述DNA1-cCRP抗原偶联物的浓度为1～5nM；所述DNA2-cCRP抗体偶联物的浓度为5～20nM；所述标记吖啶酯（AE）的DNA3的浓度为0.05～0.2μM；以及所述氧化石墨烯（GO）结合抗氧化剂（AOD）的浓度为20μg/ml。

3.根据权利要求1所述的基于均相化学发光免疫竞争法检测犬C-反应蛋白的试剂盒，其中，所述DNA1-cCRP抗原偶联物的浓度为1nM；所述DNA2-cCRP抗体偶联物的浓度为10nM；所述标记吖啶酯（AE）的DNA3的浓度为0.1μM。

4.根据权利要求1所述的基于均相化学发光免疫竞争法检测犬C-反应蛋白的试剂盒，其中，所述DNA1 3’端修饰NH2C7，通过偶联剂二（磺基琥珀）辛二酸（BS3），与cCRP抗原上的氨基共价结合，形成DNA1-cCRP抗原偶联物。

5.根据权利要求1所述的基于均相化学发光免疫竞争法检测犬C-反应蛋白的试剂盒，其中，所述DNA2 5’端修饰NH2C6，通过偶联剂BS3与cCRP抗体上的氨基共价结合，形成DNA2-cCRP抗体偶联物。

6.根据权利要求1所述的基于均相化学发光免疫竞争法检测犬C-反应蛋白的试剂盒，其中，所述DNA3 5’端修饰吖啶酯（AE）；所述DNA3从5’端开始的3-10与所述DNA2从3’端开始的3-10碱基位点的碱基互补；所述DNA3从3’端开始的5-12与所述DNA1从5’端开始的3-10碱基位点的碱基互补。

7.根据权利要求1所述的基于均相化学发光免疫竞争法检测犬C-反应蛋白的试剂盒，其中，所述DNA1与所述DNA2有7个碱基互补。

8.根据权利要求1所述的基于均相化学发光免疫竞争法检测犬C-反应蛋白的试剂盒，其中，所述DNA3分别有8个碱基与所述DNA1、所述DNA2互补。

9.一种应用权利要求1-8中任一项所述的试剂盒检测犬C-反应蛋白的方法，其中，所述方法包括以下步骤：

（1）将不同浓度的校准溶液或者含有cCRP全血样本与试剂盒中的检测液按照体积比为1:10的量混合，混合液置于HSCL-10000化学发光仪中，并在37℃下温育5min；

（2）在温育后，通过HSCL-10000化学发光仪加入200μL化学发光底物，并立即通过光电倍增管（PMT）检测该溶液的化学发光信号，检测时间3s，根据记录的化学发光值（RLU），获得cCRP的校准曲线和待测样本中cCRP的浓度。