[发明专利]一种从铁皮石斛中提取RNA的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种从铁皮石斛中提取RNA的试剂盒，其特征在于，其包括如下组分：

(1)溶液A：β-巯基乙醇；

(2)溶液B：1～2g/L的三羟甲基氨基甲烷、1.5～2.5g/L的2％十六烷基三乙基溴化铵、8～9g/LNaCl、0.5～1g/L EDTA，硼酸调pH为5.3～5.5；

(3)溶液C：18～22g/L乙酸钾；

(4)溶液D：乙醇；

(5)溶液E：氯仿；

(6)溶液F：异丙醇；

(7)溶液G：75％乙醇；

(8)溶液H：DEPC水。

2.采用权利要求1所述试剂盒从铁皮石斛中提取RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取铁皮石斛组培苗茎秆放入研钵中，加入液氮，研磨成粉末，得到铁皮石斛组织样品；

(2)取0.1g铁皮石斛组织样品，加入0.8～1.2ml溶液B、18～22μL溶液A，置于50～58℃水浴18～22min后，加入80～120μL溶液C、80～120μL溶液D、550～650μL溶液E，涡旋0.5～3min，离心，取上清，往上清中加入0.8～1.2mL RNA提取试剂RNAzol，得到提取液；

(3)往步骤(2)获得的提取液中加入180～220μL溶液E，振荡混匀后，室温放置10～20min，离心取上清，然后重复本步骤一次，得到上清液；

(4)往步骤(3)获得的上清液中加入溶液F，混匀后室温放置10～30min，然后离心弃掉上清液；

(5)往步骤(4)离心后得到的沉淀中加入0.8～1.2ml溶液G，温和振荡，悬浮沉淀，然后离心弃掉上清液，将得到的沉淀室温晾干5～10min，用25～35μL溶液H溶解，即为铁皮石斛RNA样品。

3.如权利要求2所述的从铁皮石斛中提取RNA的方法，其特征在于，步骤(2)-(5)中，离心条件为：3～5℃，10000～13000r/min。

4.如权利要求2或3所述的从铁皮石斛中提取RNA的方法，其特征在于，步骤(4)中，溶液F的用量体积为上清液体积的0.7～1倍。