[发明专利]一种哑铃型DNA/铜纳米粒子荧光生物传感器的制备方法及其在定量检测ATP中的应用

权利要求书

1.一种哑铃型DNA/铜纳米粒子荧光生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将5＇端磷酸化的DSDNA溶液在缓冲溶液中，然后加入T4 DNA连接酶和ATP，反应50～60min，得到哑铃型DNA溶液；

(2)将步骤(1)得到的哑铃型DNA溶液加入到缓冲溶液中，再加入Cu²⁺溶液和抗血酸钠溶液，混合均匀并反应至少5min，即可得到哑铃型DNA/铜纳米粒子荧光生物传感器；

所述5′端磷酸化的DSDNA的基因序列为：

5’-PO₄-ATATATATATATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTATATATATATATATATATATATATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTATATATATATAT-3’；

步骤(2)中，所述哑铃型DNA溶液、缓冲溶液、Cu²⁺溶液、抗血酸钠溶液的体积之比为1:1:1:1。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)之后还包括：向所述的哑铃型DNA溶液中加入Exo I和Exo III，反应60min，然后于80℃孵育5分钟。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述5′端磷酸化的DSDNA溶液、缓冲溶液、T4 DNA连接酶、ATP的体积之比为50:144:1:5；所述5′端磷酸化的DSDNA溶液的浓度为1μM；所述T4 DNA连接酶的浓度为350U/μL。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲溶液为PH＝7.6的10mMMOPS缓冲溶液。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，5′端磷酸化的DS DNA、Exo I、Exo III的体积之比为10:1:1。

6.如权利要求1-5任意一项所述的制备方法制备得到的哑铃型DNA/铜纳米粒子荧光生物传感器在定量检测ATP中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，ATP的定量检测方法包括以下步骤：

(a)分别将5′端磷酸化的DSDNA溶液在缓冲溶液中，然后分别加入T4 DNA连接酶和不同浓度的ATP，反应50～60min，得到哑铃型DNA溶液；

(b)分别将步骤(1)得到的哑铃型DNA溶液加入到缓冲溶液中，再加入Cu²⁺溶液和抗血酸钠溶液，混合均匀并反应至少5min，分别得到铜纳米粒子荧光生物传感器；

(c)分别测试步骤(b)得到的各铜纳米粒子荧光生物传感器的荧光强度，以ATP浓度为横坐标，各铜纳米粒子荧光生物传感器在630nm处的荧光强度值为纵坐标作图，构建标准曲线，得到线性方程；

(d)根据标准曲线或者线性方程，即可根据待测ATP重复步骤(a)和(b)制备的铜纳米粒子荧光生物传感器的荧光强度，计算出待测ATP的浓度。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤(c)中，设置荧光分光光度计的激发波长和发射波长分别为340nm、630nm。