[发明专利]红棕毛筒腔菌在制备逆转肿瘤多药耐药性为敏感性的药物中的应用

说明书

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种逆转肿瘤细胞多药耐药性为敏感性的红棕毛筒腔菌。该菌株已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏日：2019.11.20，保藏登记号为CCTCC M 2019957 PF02‑2。本发明提供了红棕毛筒腔菌PF02‑2发酵获得活性代谢产物的方法；该代谢产物具有逆转肿瘤细胞多药耐药性为敏感性的活性，致使肿瘤细胞对药物重新敏感，有助于抗肿瘤药物发挥药效，为医用药物新来源的开发增添了新的途径。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及红棕毛筒腔菌在制备逆转肿瘤多药耐药性为敏感性的药物中的应用。

背景技术

肿瘤多药耐药(Multidrug Resistance,MDR)是指肿瘤细胞不仅对一种抗肿瘤药物产生耐药,而且对其他结构不同、作用机制各异的抗肿瘤药物亦产生交叉耐药现象。尽管肿瘤治疗的研究不断进步,但是仅有不到50％肿瘤对化疗敏感，超过50％的肿瘤对化疗药物迅速产生耐药，一旦耐药产生，医生将束手无策。因此，寻找低毒高效的肿瘤耐药逆转剂已是肿瘤化疗药物领域研究的热点。

P-糖蛋白(P-gp)是ABC转运蛋白家族最具有代表性的蛋白之一。 P-gp结构为同源二聚体，每个单体由两束α螺旋和两个核苷酸结合区构成，分子量为170kD，由1280个氨基酸残基组成。P-gp与药物的结合口袋主要位于α螺旋区。核苷酸结合区的功能为与ATP结合，为P-gp 与底物的结合和转运过程提供能量。研究表明，P-gp能够转运化学性质和结构多样性的药物，包括部分抗癌药物，如阿霉素、紫杉烷类等，引起多药耐药(MDR)现象，导致癌症治疗的失败。因此，P-gp抑制剂和底物的研究对于癌症治疗具有重要的意义，可将P-gp抑制剂与化疗药物共同给药作为克服MDR的有效策略。

目前，现已经开发了几代P-gp抑制剂，第一代逆转剂包括他莫昔芬、环孢素A等，其中以维拉帕米和环胞菌素为典型代表。因此类药物通常缺乏P-糖蛋白的特异性，会产生严重的副作用，第一代逆转剂也在临床上受到很大程度的限制(Sato W.et al.1991)。第二代逆转剂孢菌素类似物伐司朴达(valspodar，PSC833)、右旋维拉帕米 (dexverapamil)等，其中以地塞米松为代表，然而，第二代逆转剂的开发由于高毒性和药物相互作用而产生一系列副作用而受到限制 (Rowinsky E.K.et al.1998；Hyafil F.et al.1993；Keller R.P.etal. 1992)。第三代P-糖蛋白抑制剂的主要代表药物有Tariquidar(XR9576)、 Zosuquidar(LY335979)、S9788等，其中以Tariquidar(XR9576)和 WK-X-34为代表(Massey P.R.etal.2014)。而从天然产物及其衍生物中开发P-gp抑制剂已成为第四代抑制剂研发的新方向和重点。目前尚未发现从微生物来源的天然产物中开发P-gp抑制剂的具体报道。

毛筒壳科真菌绝大部分是在陆生木质基质上生长的腐生菌，也有一部分生长在水生栖息地(Boonmee S.et al.2014)。近几年来有很多研究发现可以从水生的环境中分离到毛筒壳科真菌(Luo Z.L.et al. 2017；Chaiwan N.et al.2017)。已有研究证明这个科的真菌拥有产活性次级代谢产物的巨大潜力(Mao Z.L.et al.2014)。在本课题组的前期研究中，从腐烂的木质基质上采集的毛筒壳科真菌中选取了19 株进行研究，采用平板对峙法、生长速率法和MTT法，分别测定了这 19株毛筒壳科真菌活体菌株抑菌活性、发酵物抑菌活性以及发酵粗提物对不同的人体肿瘤细胞增殖的抑制作用(《毛筒壳科真菌次级代谢产物生物活性的评价》，范翠等2019年发表)，发现了该科真菌及其次级代谢产物具有良好的活性，前景非常广阔。但是未研究该科真菌在MDR中的应用，因此，本次研究试图通过从毛筒壳科真菌中来筛选有效的多药耐药逆转剂。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供了红棕毛筒腔菌在制备逆转肿瘤细胞多药耐药性为敏感性的药物中的应用。

具体是通过以下技术方案来实现的：