[发明专利]红棕毛筒腔菌在制备逆转肿瘤多药耐药性为敏感性的药物中的应用

权利要求书

1.红棕毛筒腔菌在制备逆转人乳腺癌细胞多药耐药性为敏感性的药物中的应用，其特征在于，所述红棕毛筒腔菌命名为红棕毛筒腔菌(Tubeufia rubra Y.Z.Lu,J.C.KangK.D.Hyde)PF02-2，保藏单位：中国典型培养物保藏中心保藏，保藏日：2019.11.20，保藏登记号为CCTCC M 2019957PF02-2；

所述逆转活性是指红棕毛筒腔菌PF02-2，及其代谢产物、药物制剂对P-糖蛋白功能具有抑制作用；

所述逆转人乳腺癌细胞多药耐药性，是指逆转癌细胞已产生的多药耐药性，致使其对于抗癌药物重新敏感的活性。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述红棕毛筒腔菌PF02-2由以下方法获得：

(1)经采集的腐木在显微镜下镜检；

(2)接种针消毒，挑取腐木表面白色菌落，转移至40-80μL无菌水中制成孢子悬浮液；

(3)将孢子悬浮液转移到5-15mL水-琼脂平板培养皿中，置于26-30℃中培养10-14小时后，挑取已萌发生长出菌丝的单个分生孢子接种到5-15mL马铃薯葡萄糖琼脂培养皿中，于26-30℃下培养即得PF02-2纯菌落。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述红棕毛筒腔菌PF02-2由以下方法保存：

(1)单孢源菌种悬浮液的制备：在酒精灯火焰旁用灭菌后的接种针或注射用针头从经分离得到的PF02-2纯菌落上挑取分生孢子，置于40-80μL无菌水，混匀形成单孢源菌种悬浮液；

(2)萌发单孢的制备：将步骤(1)所述的孢子悬浮液转移到5-15mL水-琼脂(WA)平板培养皿中，置于25-28℃下，12h后孢子开始萌发生长出菌丝；

(3)保存菌落的制备：将步骤(2)所述的已萌发的单个分生孢子在酒精灯火焰旁于显微操作台上快速转移至5-15mL PDA平板培养皿中，密封带密封后置于26-30℃条件下培养，即得待保存菌落； 待该菌落长到直径为3-6cm后转移至1-1.5mL PDA及水-甘油冻存管中，保藏于0-4℃中作为菌种备用。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述红棕毛筒腔菌PF02-2代谢产物的制备方法，按以下步骤进行：

(1)菌种活化培养：将保存的红棕毛筒腔菌PF02-2菌种移至5-15mL马铃薯葡萄糖PDA培养基上，在26-30℃条件下培养，至菌丝覆盖整个培养皿，用直径为7mm打孔器打孔获得菌饼，供接种用；

(2)液体发酵培养：发酵液由以下重量份数的物质组成：葡萄糖4份、蛋白胨1份、水100份，每500mL三角瓶装发酵液200mL；配制后121℃灭菌20-30min，待冷却至40℃在无菌条件下挑取1直径为7mm菌饼，在26-30℃条件下，静置发酵培养28-32天；

(3)发酵液提取：发酵完毕后收集发酵液，加入发酵液体积2-4倍乙酸乙酯萃取，在真空条件下浓缩至浸膏，即得。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗癌药包括但不限于紫杉醇、紫杉烷类、阿霉素、丝裂霉素、顺铂、氟尿嘧啶、环磷酰胺。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述制备逆转人乳腺癌细胞细胞多药耐药性为敏感性的药物，是指将红棕毛筒腔菌PF02-2及其代谢产物加入药学上可接受的辅料或载体，制成所需的药物制剂。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、混悬剂、注射剂、栓剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。