[发明专利]一种白色茶树菇及其分子标记鉴定方法

说明书

本发明提供了一种白色茶树菇及其分子标记鉴定方法，属于茶树菇领域。本发明以白色茶树菇Ag.c0002和野生型茶树菇‘茶5’为亲本进行杂交选育出抗逆性强、产量高、子实体白色，朵形好，具有很好地开发应用前景的白色茶树菇（Agrocybe cylindracea）BC5。该菌种已于2019年12月05日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO:M 20191017。同时提供了对该菌株专一性强、操作简便的分子标记鉴定方法。

技术领域

本发明属于茶树菇领域，更涉及一种白色茶树菇及其分子标记鉴定方法。

背景技术

茶树菇Agrocybe cylindracea，中文名称为柱头田头菇，是我们熟悉的一种珍稀食用菌，其营养价值很高，味道鲜美，深受人们喜爱，同时还是民间传统药用菌，享有“中华神菇”之称。

子实体颜色是一个重要的商品性状，野生型茶树菇的子实体颜色为浅褐色或褐色（统称为褐色），白色是野生型出现的一个变异性状，属于珍稀的一个品种。目前栽培的茶树菇子实体颜色主要是褐色的品种，白色品种比较少，且种植的白色品种是自然变异的菌株，未经过性状的改良，产量比较低，然而在价格上，当前白色茶树菇的市场价格比褐色的高，干品白色茶树菇一斤比褐色的高约10元，具有较好的经济效益。

本发明开展白色茶树菇的育种，通过出菇筛选，获得一个性状比较好的白色茶树杂交种。

发明内容

本发明的目的在于提供一种白色茶树菇及其分子标记鉴定方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种白色茶树菇，其分类命名为白色茶树菇（Agrocybe cylindracea）BC5，该菌株已于2019年12月05日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO: M 20191017。

上述白色茶树菇菌株（Agrocybe cylindracea）BC5，简称白色茶树菇BC5是以白色茶树菇和褐色茶树菇进行多次杂交选育的白色茶树菇BC5，其继承了白色茶树菇子实体白色的性状，又遗传了褐色茶树菇抗逆性强、产量高等优良性状，打破了现有白色茶树菇基因资源较单一的局面。白色茶树菇BC5子实体白色，朵形好，抗逆较好，栽培周期同常规的茶树菇，产量高，具有很好地开发应用前景。

白色茶树菇BC5（CCTCC NO: M 20191017）的母种培养基为马铃薯葡萄糖培养基，即培养基是PDA：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂条20g，水1000mL；培养条件为常规的茶树菇培养，无特殊要求。

本发明还提供了所述白色茶树菇的分子标记鉴定方法，包括菌丝的培养与收集、基因组DNA的提取、ITS(Internal transcribed spacer转录间隔区)-PCR扩增、特异酶切片段标记的产生和酶切产物的电泳检测。

所述特异酶切片段标记的产生：在4～6 μL ITS-PCR扩增产物中, 加入1 μL AccⅡ酶的酶切Buffer，0.4～0.6 μL AccⅡ酶, 2.4～ 4.6 μL ddH₂O，总体积10 μL，37℃水浴3.5～4 h，取酶切产物用于电泳检测；

所述酶切产物的电泳检测：经电泳检测，在一个泳道上只有同时出现分子量为680～695 bp、520～535 bp和150～165 bp的DNA标记条带，是白色茶树菇（Agrocybe cylindracea）BC5标记。其中电泳条件为：取酶切产物10μL，与1μL上样缓冲液混匀，点样于1.2%的琼脂糖凝胶上，于0.5 X TBE缓冲液中，5V/cm电压下电泳；所述上样缓冲液：0.1％溴酚蓝, 40% 蔗糖。