[发明专利]一种白色茶树菇及其分子标记鉴定方法

权利要求书

1.一种白色茶树菇，其特征在于：所述白色茶树菇其分类命名为：白色茶树菇（Agrocybe cylindracea）BC5，已于2019年12月05日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO: M 20191017。

2.一种如权利要求1所述的白色茶树菇的分子标记鉴定方法，其特征在于：包括菌丝的培养与收集、基因组DNA的提取、ITS-PCR扩增、特异酶切片段标记的产生和酶切产物的电泳检测；

所述特异酶切片段标记的产生：在4～6 μL ITS-PCR扩增产物中, 加入1 μL AccⅡ酶的酶切Buffer，0.4～0.6 μL AccⅡ酶, 2.4～4.6 μL ddH₂O，总体积10 μL，37℃水浴3.5～4 h，取酶切产物用于电泳检测；

所述酶切产物的电泳检测：经电泳检测，在一个泳道上只有同时出现分子量为680～695bp、520～535 bp和150～165bp的DNA标记条带，是白色茶树菇（Agrocybe cylindracea）BC5标记。

3.根据权利要求2所述的白色茶树菇的分子标记鉴定方法，其特征在于：所述ITS-PCR扩增的反应体系：1.2 μl 含量80~150 ng的DNA，2.5 μl 10×PCR buffer，2 μl 浓度为2.5m mol/L的 dNTP，1 μl 浓度为10 μmol/L的ITS1, ITS1序列为5’- TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’，1 μl 浓度为10 μmol/L的ITS4，ITS4序列为5’- TCCTCCGCTTATTGATATGC -3’，0.3 μl酶活为5 U/ul 的Taq DNA Polymerase,17 μl ddH₂O；

ITS-PCR扩增反应程序：94℃预变性5 min；94℃变性1 min，55℃退火0.5 min，72℃延伸0.8～1 min, 30～35个循环;72℃延伸10 min。