[发明专利]一种多糖改性的无细胞基质复合材料、制备及应用

说明书

本发明属于无细胞基质技术领域，具体涉及一种多糖改性的无细胞基质复合材料、制备及应用。将新鲜的膀胱基质经脱脂、碱处理、酶处理及冻融四步无细胞处理后，与多糖复合，利用多糖上的多个氨基与无细胞膀胱上的活性基团形成交联，提高材料的三维纤维网络结构稳定性，同时将多糖接枝到无细胞膀胱材料中，从而赋予无细胞基质材料优良生物相容性。其中，多糖包括壳聚糖、透明质酸及硫酸软骨素。本发明采用四步无细胞处理、多糖复合、无毒交联等方法制备改性无细胞膀胱基质复合材料，可用于构建再生性角膜材料、膀胱材料、口腔修复膜等组织再生修复材料。

技术领域

本发明属于无细胞基质技术领域，具体涉及一种多糖改性的无细胞基质复合材料、该复合材料的制备方法及应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本公开的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

无细胞膀胱基质取材于异种生物，具有来源广泛、成本低廉、低免疫原性、以及功能上类似于膀胱等优点，是膀胱修复的热点材料。但现有无细胞方法制备的无细胞猪膀胱基质材料存在机械性能差、渗尿、降解不可控、生物相容性不佳等缺点，此外，由于无细胞过程中化学试剂的使用，破坏了膀胱中原有的生物活性因子，降低了无细胞膀胱基质诱导组织再生的能力。

壳聚糖具有优良的生物相容性、生物降解性、壳聚糖在植入体内后，可刺激免疫细胞分泌细胞因子、免疫因子，加速细胞增殖、加快植入的支架材料与组织融合。在体内溶菌酶的作用下，壳聚糖会缓慢降解成为寡糖、单糖，被人体吸收，复合壳聚糖可使基质的孔隙率降低，从而降低修复时漏尿的可能。硫酸软骨素广泛存在于细胞外基质和细胞表面，具有抗凝血作用，在无细胞的过程中会导致硫酸软骨素的流失，导致无细胞膀胱基质性能下降，将其复合在基质上可增强基质的生物相容性，从而促进细胞的粘附增殖，诱导组织再生。透明质酸广泛存在于组织器官上，具有保护细胞不受病菌侵害，防止感染，加快创伤恢复的作用。无细胞膀胱基质复合透明质酸后可调控胶原的生成，减少移植物挛缩的发生。发明人的以往研究中，提供了一种通过复合水溶性多糖对无细胞真皮基质材料进行改性修饰的方法，修饰后复合材料可用于制备生物辅料、复合移植支架等，具有良好的力学性能。

理想的膀胱修复材料应至少具备以下特征：1.具有良好的生物相容性，不会引起免疫排斥，2.有足够的机械性能，使膀胱在充盈和排空尿液时不破裂，3.能够有效防止尿液的渗透，避免尿液渗透侵蚀周围组织，4.可诱导血管和组织的新生，5.具有适宜的降解速率。但现有方式制备的无细胞膀胱基质普遍存在渗尿、机械强度低、易降解等缺点，故需开辟新思路和新制备工艺，制备具有优良理化性能的改性无细胞膀胱基质组织工程修复材料。

发明内容

针对上述研究背景，发明人认为通过改性增加无细胞膀胱基质的机械强度，可以有效的降低无细胞膀胱材料的渗漏率，可应用于膀胱修复等。针对目前采用的无细胞膀胱基质存在的不足，本发明通过改性和交联处理膀胱，可降低其抗原性，提高其抗降解性及生物相容性，并增强其诱导组织再生的能力，具有巨大的应用前景。针对该研究成果，本发明提供以下技术方案：

第一方面，提供一种改性无细胞膀胱基质复合材料的制备方法，所述制备方法包括对膀胱组织进行无细胞处理及采用水溶性多糖对无细胞处理后的膀胱基质进行复合的步骤，所述无细胞处理包括采用碱液、表面活性剂及蛋白酶进行处理。

优选的，所述无细胞处理具体步骤如下：

按照料液比3~5:1向去除脂肪、筋膜的膀胱组织中加入碱液及表面活性剂成分作用一段时间；通过盐溶液及酸液对膀胱组织进行脱碱；向脱碱后的猪膀胱中加入蛋白酶脱除残余细胞后冻融。

进一步优选的，所述碱液为混合表面活性剂后的碱液。

在一些具体的实施例中，所述表面活性剂为Trition X-100或SDS，所述碱为NaOH。

在一些具体的实施例中，所述表面活性剂的浓度为0.3%-0.4%。