[发明专利]肿瘤乳酸微环境相关非编码小RNA分子谱及其应用

权利要求书

1.一种定量小分子RNA的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)收集样本；样本处于含有乳酸的环境，乳酸的浓度范围是100-250U/L；

(2)茎环法定量PCR；

(3)获得目标miRNA分子或者5’-tiRNA分子。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的样本是离体的实体瘤样本，或者加入乳酸用于模拟肿瘤微环境的样本。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的样本是体外培养的恶性淋巴瘤细胞。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括深度测序的步骤。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标miRNA分子是hsa-miR-9-5p、hsa-miR-210-3p、hsa-miR-7-5p、hsa-miR4521或者hsa-miR-7974；

所述的5’-tiRNA分子是5’-tiRNA^HisGUG。

6.一种肿瘤检测标志物，其特征在于，它通过权利要求1的方法获得。

7.如权利要求6所述的肿瘤检测标志物，其特征在于，它含有hsa-miR-9-5p、hsa-miR-210-3p、hsa-miR-7-5p、hsa-miR4521、hsa-miR-7974或者5’-tiRNA^HisGUG中的一种或者几种，或者这些RNA相对应的DNA。

8.如权利要求6所述的肿瘤检测标志物，其特征在于，

hsa-miR-9-5p的成熟核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示；

hsa-miR-210-3p的成熟核苷酸序列如SEQ ID NO 2所示；

hsa-miR-7-5p的成熟核苷酸序列如SEQ ID NO 3所示；

hsa-miR4521的成熟核苷酸序列如SEQ ID NO 4所示；

hsa-miR-7974的成熟核苷酸序列如SEQ ID NO 5所示；

5’-tiRNA^HisGUG的成熟核苷酸序列如SEQ ID NO 6所示。

9.权利要求6所述的肿瘤检测标志物的应用，其特征在于，在正常乳酸浓度的淋巴瘤患者外周血单核细胞中，使用荧光定量PCR法检测；所述的RNA的正常参考值如下：

hsa-miR-9-5p，0.32-4.44；

hsa-miR-210-3p，0.4-1.50；

hsa-miR-7-5p，0.14-2.19；

hsa-miR4521，0.3-1.47；

hsa-miR-7974，0.23-3.69；或者

5’-tiRNA^HisGUG，0.62-7.48。

10.权利要求6所述肿瘤检测标志物的应用，其特征在于，所述的RNA作为恶性肿瘤的诊治或者预后评判靶标的标志物。

11.如权利要求10所述的应用，其特征在于，所述的恶性肿瘤是恶性淋巴瘤。

12.如权利要求10所述的应用，其特征在于，所述的恶性肿瘤源自EBV阳性或者EBV阴性的B淋巴瘤细胞。

13.一种检测恶性淋巴瘤的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有定量检测hsa-miR-9-5p、hsa-miR-210-3p、hsa-miR-7-5p、hsa-miR4521、hsa-miR-7974或者5’-tiRNA^HisGUG的试剂。

14.如权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有hsa-miR-9-5p、hsa-miR-210-3p、hsa-miR-7-5p、hsa-miR4521、hsa-miR-7974或者5’-tiRNA^HisGUG的扩增引物。