[发明专利]一种应用于养猪发酵床的菌种筛选方法和应用

权利要求书

1.一种应用于养猪发酵床的菌种筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采集猪粪尿样品；

(2)模拟发酵床培养：

S1：将采集的0.1-0.5份猪粪尿样品与0.1-0.5份灭菌麦麸混合，搅拌均匀；

S2：将2-4份灭菌锯末与2-4份无菌稻壳进行混合，再添加0.2-0.5份无菌红糖水，搅拌均匀，同时加入无菌水，使混合样含水量达40-55％；

S3：将S1得到的物料与S2得到的物料混合，并搅拌均匀，恒温培养10-60d；

(3)初筛；

(4)复筛，得到优良菌种。

2.如权利要求1所述的菌种筛选方法，其特征在于，所述初筛的具体操作步骤包括：

(a)称取2份模拟发酵床培养的样品，放入装有菌水并加有小玻璃珠的锥形瓶中，置于摇床震荡20-30min；

(b)移取步骤(a)得到的2份样品分别置于2种不同富集培养基中，恒温培养5-7d，得到样品A和样品B；

(c)将样品A分成两等份A1和A2，样品B分成两等份B1和B2，将A1和A2分别置于2种不同的富集培养基中，B1和B2分别置于2种不同的富集培养基中，恒温培养5-7d，得到样品C1、C2、C3和C4；

(d)将样品C1等分成10份：C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19和C10，

将样品C2等分成10份：C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29和C20，

将样品C3等分成10份：C31、C32、C33、C34、C35、C36、C37、C38、C39和C30，

将样品C4等分成10份：C41、C42、C43、C44、C45、C46、C47、C48、C49和C40，

将C11、C12、C13、C14、C15置于5种不同的离培养基中进行恒温培养1d，将C21、C22、C23、C24、C25置于5种不同的离培养基中进行恒温培养1d，将C31、C32、C33、C34、C35分别置于5种不同的离培养基中进行恒温培养1d，将C41、C42、C43、C44、C45分别置于5种不同的离培养基中进行恒温培养1d，然后挑取在平板上分离较好且具有代表性的单菌落，用平板划线法纯化分离，直至获得纯培养体并保存；

(e)将C16、C17、C18、C19、C10用100℃沸水煮8-10min，再进行10倍梯度稀释倒平板实验，分别置于5种不同的分离培养基中进行恒温培养2-3d；

将C26、C27、C28、C29、C20用100℃沸水煮8-10min，再进行10倍梯度稀释倒平板实验，分别置于5种不同的分离培养基中进行恒温培养2-3d；

将C36、C37、C38、C39、C30用100℃沸水煮8-10min，再进行10倍梯度稀释倒平板实验，分别置于5种不同的分离培养基中进行恒温培养2-3d；

将C46、C47、C48、C49、C40用100℃沸水煮8-10min，再进行10倍梯度稀释倒平板实验，分别置于5种不同的分离培养基中进行恒温培养2-3d；

然后挑取在平板上分离较好且具有代表性的单菌落，用平板划线法纯化分离，直至获得纯培养体并保存。

3.如权利要求2所述的菌种筛选方法，其特征在于，2种不同的富集培养基分别为：

改良牛肉膏蛋白胨培养基：红糖5-8份，牛肉膏3-5份，蛋白胨10-20份，氯化钠5-10份，pH 7.0±0.2，琼脂12份，水1000份；

改良LB培养基：红糖5-7份，酵母膏5-7份，蛋白胨10-15份，氯化钠10-12份，pH 7.0±0.2，琼脂12-15份，水1000份。