[发明专利]交联人源干细胞因子的胶原蛋白、及其制备方法、在美容和皮肤修复领域的应用

权利要求书

1.交联人源干细胞因子的胶原蛋白的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、接种、培养脐带间充质干细胞，并收集上清液；

S2、过滤、浓缩上清液，得到干细胞因子，并用ELISA试剂盒确定因子浓度；

S3、将人源干细胞因子与胶原蛋白进行交联固化；

所述步骤S1的具体操作为用胶原蛋白包被细胞培养瓶底部，包被方法：按10mgcollagen I、99.167mL H₂O、0.833mL 6M HCl进行试剂配制，常温静置3小时后使用0.45μm滤器过滤，细胞瓶内铺板浓度0.5mL/cm² ，底部自然干燥；

从细胞库中获取P3脐带间充质干细胞，接种在包被胶原蛋白I型的培养瓶中，按1-3×10⁴ /cm² 进行接种，放入37℃，5%CO₂ 培养箱中培养2-3d，细胞融合度达到85-90％的时候，收集细胞上清；

所述步骤S2的具体操作为将收集的干细胞培养上清经0.22μm的滤膜过滤，然后通过分子量为50KD的Vivaflow 50回旋流/切向流超滤器进行干细胞上清液的浓缩，接着将浓缩液通过分子量为3KD的Vivaflow 50回旋流/切向流超滤器，收集截留液，即为细胞因子浓缩液；

所述步骤S3中，人源干细胞因子含量10wt％，胶原蛋白的含量为100IU/mL，交联方法为使用2.5%戊二醛4℃过夜进行交联固化；然后利用2%硼氢化纳浸泡进行脱醛处理，再用去离子水冲洗6次，将清洗后的交联物加入冻干保护剂，置于-80℃冰箱中过夜后，于冷冻干燥器中冻干，制备得到交联人源干细胞因子的胶原蛋白。