[发明专利]一种免疫球蛋白结合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明提供的一种免疫球蛋白结合蛋白包括蛋白A的B结构域，蛋白G的C2结构域，蛋白L的B3结构域的变异体或其任意1‑3项变异体的组合，通过蛋白A、蛋白G和蛋白L不同的结合特性具有一定的互补性，是反应性更广、亲和力更高的耐碱性多功能型IBP分子。本发明中用3步层析法纯化蛋白,能稳定蛋白质量，保证蛋白纯度大于97％，内毒素水平低于1Eu/mg，符合临床用蛋白的要求。用所纯化的免疫球蛋白结合蛋白合成的免疫吸附填料稳定性增加,能有效地提高填料的使用次数，延长了填料的使用寿命。

技术领域

本发明属于生物医学材料及血液净化领域，具体涉及一种免疫球蛋白结合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

自身免疫性疾病是由于机体自身抗体的变异，对抗自身组织，引起对全身组织器官的损害而导致的一系列症状和疾病，是目前难以对付的、威胁人类健康与生命的主要疾病之一，一直以来都没有有效的治疗方法。目前，自身免疫性疾病主要的治疗方法是应用免疫抑制药物和血浆置换。前者是通过药物抑制机体的免疫系统，减轻体内抗体对抗自身组织和器官的损害，从而以达到减轻症状、延缓疾病进展的目的。由于它抑制了机体所有抗体的产生，毒副作用较大，而且对很多自身免疫性疾病及其症状治疗效果不理想；后者是通过定期地用正常人体血浆替换病人体内血浆，以清除机体内变异的免疫球蛋白。由于输入异体血浆，可能导致：1)交叉感染；2)过敏反应；3)出血倾向等。因此，寻求自身免疫性疾病更好的治疗方法是目前医学领域的一个重大研究课题。

蛋白A免疫吸附是将天然或重组的蛋白A通过共价键偶联至载体合成免疫吸附剂，通过体外循环的方法，能有效地清除血液中的免疫球蛋白。商品化的蛋白A免疫吸附柱Immunosorba和Prosorba(二者均为德国Fresenius公司产品)在1999-2001年相继获得了美国食品和药物管理局(FDA)的认证用于治疗特发性血小板减少性紫瘫和类风湿性关节炎(Prosorba)以及带有抑制因子的血友病(Immunosorba)。2015年费森尤斯推出新的吸附柱LIGASORB，用于治疗急性的自身免疫性疾病，配基是基因工程重组的蛋白A，载体是聚甲基丙烯酸酯，一次性使用。临床应用结果表明，基于亲和层析原理的蛋白A免疫吸附血液净化治疗，对自身免疫性疾病具有独特的治疗效果：1)对很多免疫抑制药物治疗效果不理想的自身免疫性疾病具有更好的治疗效果，2)对机体几乎没什么毒副作用，3)克服了血浆置换的副作用，4)与免疫抑制药物同时应用，可将免疫抑制药物的用量降到最低，以减少免疫抑制药物的毒副作用等。随着医学的快速发展，器官移植应用越来越普遍。蛋白A免疫吸附血液净化治疗在器官移植中的作用越来越重要，应用越来越广泛：1)在器官移植前进行蛋白A免疫吸附血液净化治疗可减少排斥反应发生的概率；2)在器官配型时，应用蛋白A免疫吸附血液净化治疗，可排除因ABO血型不符而导致的配型问题；3)当出现排斥反应迹象时，应用蛋白A免疫吸附血液净化治疗，可防止排斥反应的发生；4)器官移植后，应用蛋白A免疫吸附血液净化治疗，可减小免疫抑制药物的用量，从而减少免疫抑制药物的毒副作用等。同时，越来越多的研究表明，对于恶性肿瘤，蛋白A免疫吸附血液净化治疗也有很好的辅助治疗效果，能增强恶性肿瘤的化疗和放疗效果，可能的原因是由于免疫吸附清除了肿瘤患者体内产生的免疫抑制复合物。

免疫球蛋白结合蛋白(Immunoglobulin-binding proteins,IBP)是一类来源于细菌、能选择性吸附哺乳动物(包括人)的免疫球蛋白的蛋白分子。这类分子往往包含一定程度的重复序列(即同源片段)，且结构简单、稳定性高，能与免疫球蛋白进行可逆结合等。其中，最具有代表性的三种IBP是：蛋白A、蛋白G和蛋白L。

蛋白A，全称金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal protein A,SPA)，是目前研究最透彻的免疫球蛋白结合蛋白。天然蛋白A分子量约42kDa，通过其羧端的细胞壁结合域被结合到细菌的细胞壁上，包括5个免疫球蛋白结合区，被称为E、D、A、B和C区，每个蛋白A分子可结合两个IgG分子。蛋白A与人IgG的IgG1、IgG2、IgG4三个亚型的反应性为100％，与IgG3的反应性较低，约35％。对IgM和IgA的反应性也相对较低，对IgE则几乎无反应性。