[发明专利]HPLC同时测定秃疮花中十种生物碱的检测方法

说明书

本发明公开了一种HPLC同时测定秃疮花中十种生物碱的检测方法，涉及中药制药检测技术领域。本发明包括采用HPLC 525‑2707TCM‑2489色谱系统，柱型C18，Breeze电脑程序系统，流动相为甲醇‑水洗脱体系，用于秃疮花中十种生物碱中任意1～10个化合物的同时测定。本发明建立了罂粟科植物秃疮花和白屈菜中10种生物碱类化合物浓度与峰面积之间的线性回归方程，得出10种生物碱类化合物的保留时间，为进一步定量测定药用植物中单体化合物的含量奠定实验基础，提供理论依据，(1)仪器自控流动相配比，基本消除偶然误差；(2)流动相为甲醇‑水洗脱体系；(3)无需添加磷酸二氢钾、冰乙酸、三乙胺等或调节pH；(4)同时测定10种生物碱的线性回归方程和保留时间。

技术领域

本发明属于中药制药检测技术领域，特别是涉及一种HPLC同时测定秃疮花中十种生物碱的检测方法。

背景技术

秃疮花是罂粟科，秃疮花属多年生草本植物，高可达80厘米，全体含淡黄色液汁，被短柔毛，茎多，绿色，基生叶丛生，叶片狭倒披针形，羽状深裂，小裂片先端渐尖，表面绿色，背面灰绿色，叶柄条形，茎生叶少数，生于茎上部，裂片具疏齿，先端三角状渐尖；聚伞花序；花梗无毛；具苞片。分布于中国云南西北部、四川西部、西藏南部、青海东部、甘肃南部至东南部、陕西秦岭北坡、山西南部、河北西南部和河南西北部，生长在海拔400-3700米的草坡或路旁、田埂、墙头、屋顶。秃疮花的根及全草可药用，有清热解毒、消肿镇痛、杀虫等功效，可治风火牙痛、秃疮、痈疽等。秃疮花冬春覆盖率高，可作为果园的保墒植物。

分析方法的建立有助于加快秃疮花有效成分的进一步研究，也为今后秃疮花相关产品的质量控制提供了技术支持。但是由于秃疮花中的生物碱结构、理化性质均比较相近，分离难度较大，现有的检测方法不能很好的分离大多数生物碱以及其他杂质。因此精度不高，实际操作过程中容易出现差错。

发明内容

本发明的目的在于提供一种HPLC同时测定秃疮花中十种生物碱的检测方法，通过采用HPLC色谱系统，柱型C18，Breeze电脑程序系统以及流动相为甲醇-水洗脱体系，解决了现有的仪器检测过程中存在偶然误差、只能单一检测一种生物碱，检测效率低，需要添加多种试剂调节的问题。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明为一种HPLC同时测定秃疮花中十种生物碱的检测方法，包括采用HPLC525-2707TCM-2489色谱系统，柱型C18，Breeze电脑程序系统，流动相为甲醇-水洗脱体系，用于秃疮花中十种生物碱中任意1～10个化合物的同时测定；

血根碱、黄莲碱、白屈菜红碱、白屈菜碱、异紫堇定碱、紫堇碱、小檗碱、黄莲碱、原阿片碱、木兰花碱；

其中，洗脱方法为：0～5min用10％甲醇-水体系溶液平衡柱子，5～35min由10％甲醇水溶液过渡到100％甲醇体系，进行10％甲醇～100％甲醇体系梯度洗脱，45～48min由100％甲醇过渡为10％甲醇-水体系，48～50min用10％甲醇-水体系平衡柱子；

其中，柱温25℃，上样量为1mL，进样体积为10μL，每个样品运行检测时间为50min。

进一步地，所述流动相为：溶剂A：甲醇，溶剂B：水或溶剂A：乙腈，溶剂B：水。

进一步地，所述柱型C18填料粒径为5μm,250mm×4.60mm，流速为1ml/min。

进一步地，其中10个化合物对照品的制备通过以下步骤完成：

步骤一：提取，取药材秃疮花，粗粉碎，置于提取罐中，加入50-99％的乙醇，回流提取2小时，滤过，药渣用50-99％的乙醇，回流提取2小时，滤过，合并两次滤液，65℃减压浓缩成RD1.3-1.35的浸膏；