[发明专利]用于检测哈维弧菌的TaqMan探针定量检测方法及相应的试剂盒在审
| 申请号： | 201911236852.X | 申请日： | 2019-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN111518928A | 公开（公告）日： | 2020-08-11 |
| 发明（设计）人： | 唐伟;杨荣;束浩然;黄斌;蒋华;束文圣 | 申请（专利权）人： | 广东美格基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/63 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市龙岗区吉华街道甘李*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 哈维 弧菌 taqman 探针 定量 方法 相应 试剂盒 | ||
1.用于检测哈维弧菌的TaqMan探针定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、收集样品；
S2、提取基因组DNA；
S3、利用TaqMan探针定量检测检测哈维弧菌特异性基因ToxR基因；
S4、读取扩增Ct值；当所述哈维弧菌特异性基因ToxR基因的Ct值小于35时，哈维弧菌的检测结果为阳性；当所述哈维弧菌特异性基因ToxR基因的Ct值大于35时，哈维弧菌的检测结果为阴性。
2.根据权利要求1所述的用于检测哈维弧菌的TaqMan探针定量检测方法，其特征在于，所述步骤S2中还包括设计ToxR基因的检测引物和TaqMan探针的步骤。
3.根据权利要求1所述的用于检测哈维弧菌的TaqMan探针定量检测方法，其特征在于，所述哈维弧菌特异性基因ToxR基因的检测引物如SEQ ID NO:1～2所示，TaqMan探针序列如SEQ ID NO:3所示。
4.根据权利要求1所述的用于检测哈维弧菌的TaqMan探针定量检测方法，其特征在于，所述荧光定量PCR检测的反应体系为25μl，包括2×Taq PCR Mix 12.5μl，total 10uMPrimers Mix 1μl，TaqMan探针0.5μl，DNA input 2μl，H2O 9μl。
5.根据权利要求1所述的用于检测哈维弧菌的TaqMan探针定量检测方法，其特征在于，所述荧光定量PCR检测的反应条件为95℃变性2min30s，94℃退火15s，60℃退火30s，采集荧光信号，40个循环。
6.一种用于检测哈维弧菌的TaqMan探针定量检测试剂盒，其特征在于，包含所述的哈维弧菌特异性基因ToxR基因的检测引物和TaqMan探针。
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